24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2429.7
帖子: 244
在线: 77.4小时
虫号: 906981

[交流] 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～

一直在做质粒构建的工作，时间已经花了好几个月了，但是一直没有结果。各种反应条件，连接体系等都试过，都没什么用。我实在是找不出什么原因了？或者本来我这个载体的选择或者酶切位点的选择就不太对？希望高手能够指点一下！！多谢了！！

我这个质粒构建的相关信息如下：
载体：pET28b(+)
片段长度：1.6kb左右
酶切位点：Nco I CATGCCATGG （下划线为酶切位点，前面的为保护碱基）
CGGGATCC
连接用T4DNA连接酶连接
16度水浴过夜

尝试过多次，连接后大多数时间没有出现出现阳性转化子，偶尔有阳性转化子，但是是假阳性的。
同时构建的另一个基因已经构建好了，用的载体和感受态细胞都是一样，所以这两个应该没什么问题。

我实在找不出问题出在哪了，希望高手指点！！！

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验操作

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

请教关于本机的Dmol计算问题——望高手指点已经有6人回复
大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点已经有55人回复
gaussian 09 做好输入文件后总是关联不上，总说找不到文件，请高手指点！已经有16人回复
用什么溶剂给大鼠灌胃，吸收的更好？希望各位高手指点已经有8人回复
matlab程序运行总是出现下面的错误，请各位高手指点一下，谢谢了！急急急已经有5人回复
求助：用pXMJ19构建的重组质粒在谷氨酸棒杆菌不表达，应该如何解决？已经有6人回复
CdS的紫外在480nm附近总是得到很宽的肩峰，请高手指点一下可能的原因已经有6人回复
求助：关于重组质粒目的条带丢失已经有9人回复
请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。已经有15人回复
【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下已经有4人回复
我能写出来一片英文文章吗?希望高手进来指点一下,新手没金币,全散了已经有11人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-03-09 22:50:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2429.7
帖子: 244
在线: 77.4小时
虫号: 906981

引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-09 23:31:56:
可能是微量的表达对宿主有影响。可以尝试用培养基里面加葡萄糖。

培养基里面加葡萄糖？加在倒平板的固体培养基中？？还是所有的培养基都加？？

赞一下

回复此楼

5楼2011-03-10 08:46:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 17 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★
nestzhao(金币+1): 2011-03-10 08:47:10
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-10 13:05:19

引用回帖:

Originally posted by nestzhao at 2011-03-09 22:50:03:
一直在做质粒构建的工作，时间已经花了好几个月了，但是一直没有结果。各种反应条件，连接体系等都试过，都没什么用。我实在是找不出什么原因了？或者本来我这个载体的选择或者酶切位点的选择就不太对？希望高手能 ...

可能是微量的表达对宿主有影响。可以尝试用培养基里面加葡萄糖。

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2011-03-09 23:31:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖