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吃小虫的鸡

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求高人-蛋白酶活检测的问题!

求高人-蛋白酶活检测的问题!

酶活检测：用DCIP作为电子受体测定吸光度变化，然后根据DCIP的摩尔消光系数求算酶活。（跟用MTT是一个原理）

在进行最适pH测定酶活时，查文献发现DCIP的摩尔消光系数随pH变化而变化，我的pH设定为4,5,6,7,8,9,；pH7时的摩尔消光系数可以查到，但是其他pH查不到。

高人们做蛋白的最适pH时，是怎么求的酶活？
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1楼 2011-02-26 11:17:52
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
楼主可以换个酶活力单位，比如说每分钟的吸光度的变化
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4楼2011-02-27 12:52:02
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-02-26 13:37:07
引用回帖:
Originally posted by 吃小虫的鸡 at 2011-02-26 11:17:52:
求高人-蛋白酶活检测的问题!

酶活检测：用DCIP作为电子受体测定吸光度变化，然后根据DCIP的摩尔消光系数求算酶活。（跟用MTT是一个原理）

在进行最适pH测定酶活时，查文献发现DCIP的摩尔消光系数随 ...

我没有做过蛋白酶的，但是酶活力单位的确定是 需要有一个标准曲线的，并且你的蛋白酶也应该定量。

将你的蛋白酶的吸光度值与标准曲线作比较，然后再根据你加入的蛋白酶的量确定一个酶比活力。

酶活力单位通常是固定的，是你自己定义的：每分钟消耗多少底物的酶量或者每分钟生成多少的酶量定义为一个活力单位。
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2楼2011-02-26 13:05:18
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吃小虫的鸡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 吃小虫的鸡 at 2011-02-26 11:17:52:
求高人-蛋白酶活检测的问题!

酶活检测：用DCIP作为电子受体测定吸光度变化，然后根据DCIP的摩尔消光系数求算酶活。（跟用MTT是一个原理）

在进行最适pH测定酶活时，查文献发现DCIP的摩尔消光系数随 ...

to 二楼哥们：
我的酶活单位已经定义了。酶活测定要用到DCIP作为电子受体，你说的方法检测产物或底物的消耗量对于我这个反应来说不太可行。thank you all the same.
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3楼2011-02-26 14:00:24
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吃小虫的鸡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-02-27 12:52:02:
楼主可以换个酶活力单位，比如说每分钟的吸光度的变化

to哥们，不同pH范围下，消耗相同DCIP吸光度变化不一样吧，所以摩尔消光系数才不一样啊。
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5楼2011-02-28 08:36:42
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