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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组菌表达蛋白量如何测定？
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wening

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组菌表达蛋白量如何测定？

本人在做一个大肠杆菌重组体蛋白表达实验，请问大家，菌体蛋白表达量如何测定？
有几种方法？

请大伙给弟回答回答，金币送上！！！

[ Last edited by wening on 2011-2-26 at 11:23 ]
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1楼 2011-02-26 10:09:48
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wening

银虫 (正式写手)
求具体方法,把贴先顶起来
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5楼2011-03-03 15:44:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-02-26 10:21:41
wening(金币+2): 还解决不了我心中的疑问，不过谢谢了 2011-03-10 08:31:37
引用回帖:
Originally posted by wening at 2011-02-26 10:09:48:
本人在做一个大肠杆菌重组体蛋白表达实验，请问大家，菌体蛋白表达量如何测定？
有几种方法？
这个蛋白表达量计算的时候是总蛋白还是目标蛋白？
请大伙给弟回答回答，金币送上！！！

表达量当然是目标蛋白了。做SDS-PAGE，凝胶分析目标蛋白百分含量，总蛋白浓度通过考马斯亮蓝法测定。
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2楼2011-02-26 10:17:52
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wening

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-02-26 10:17:52:
表达量当然是目标蛋白了。做SDS-PAGE，凝胶分析目标蛋白百分含量，总蛋白浓度通过考马斯亮蓝法测定。

做SDS-PAGE 用什么软件分析？ 有没有具体点的方法呢？
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3楼2011-02-26 11:25:32
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nathing

银虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-02-27 10:27:06
wening(金币+1): 2011-03-10 08:32:07
粗放测量：将菌裂解后，跑SDS-PAGE，根据目标条带的大小来判断。
准确测量：若所表达的蛋白有标签的话，可以纯化后，测量OD280定量。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-02-27 08:32:43
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