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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒电泳
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒电泳

最近提了两个质粒，电泳图谱显示不在一个位置上，位置相差很多。但是单酶切的电泳结果却一样大小。请问大家这是什么原因呢？环状质粒即使一样大跑出来的结果也会不同么，还是其他什么原因。急求大家帮助。

附图：第一张是两个质粒的电泳图；第二个是单酶切后的电泳图。
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1楼 2011-02-26 08:46:32
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xiem188

铜虫 (小有名气)
★
liuwei78(金币+1):谢谢参与
难说，我最近跑的那个都有两条带的，但都是同一一，酶切下来就一样了
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2楼2011-02-26 09:04:04
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
liuwei78(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-02-26 10:23:16
用的Maker两次不一样是吗？
比对两次的大小，因为环状质粒要比线性质粒跑的快。
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3楼2011-02-26 09:07:08
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772968930

银虫 (正式写手)
★
liuwei78(金币+1):谢谢参与
可能跑的慢的解螺旋了...
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4楼2011-02-26 09:30:00
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newdaysbegin

银虫 (小有名气)
★
liuwei78(金币+1):谢谢参与
很诡异，不明白啥原因
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5楼2011-02-26 10:10:34
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
liuwei78(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-02-26 10:23:34
不知道你的质粒是不是同一批次提的，操作是否一样，有时候不同批次提的同一质粒跑电泳有些差异。酶切后都是一样的。
PS：仰慕下楼上跑错版块的
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6楼2011-02-26 10:23:06
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-02-26 11:46:29
1：很明显，两次的marker是不一样的。
2：有可能是质粒不是同一批次提取的，不同批次提的话，质粒的形态是不一样的，尤其是环状！
3：还有就是迁移率了，环状质粒跑在同一条线上不能说明两个质粒大小一样，一般都是看线性状态时的大小！
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7楼2011-02-26 10:53:14
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1): 正解 2011-02-26 11:46:44
单酶切一样就可以了啊，质粒跑电泳很诡异，不知道有多少是解螺旋了的，提的质粒过几天跑都不一定是在同一位置上
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8楼2011-02-26 11:06:51
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kerapolo

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
9楼2011-02-26 11:20:23
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-02-26 10:53:14:
1：很明显，两次的marker是不一样的。
2：有可能是质粒不是同一批次提取的，不同批次提的话，质粒的形态是不一样的，尤其是环状！
3：还有就是迁移率了，环状质粒跑在同一条线上不能说明两个质粒大小一样，一般 ...

恩，两次的marker不一样。第一个图的marker比较小，所以单从质粒跑的位置上也判断不出来它们到底多大。另外这两个质粒还真是同一批提取的。提完以后的当天就跑电泳了。第二天单酶切的。我现在就很担心这个质粒不是我要的，不知道该不该继续往下做？
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10楼2011-02-27 08:56:41
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该不会有问题的，不放心就再提次了，又不是多难的事！
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11楼2011-02-27 09:21:13
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1）很明显第一个marker上错了，都不是supercoiled marker，无法准确评估大小！
2）请问这两个菌是分别挑的单克隆吗？还是同一个克隆提了两管呢？
3）构建连接时也有可能会连了两个片段or载体，造成大小不一，酶切后又是一致的！
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12楼2011-02-27 10:27:57
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30937747

木虫 (小有名气)

个人观点

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般来说.质粒提出来有三条带..就是你第二个质粒那样.所以也许是第一质粒有点问题.
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13楼2011-02-27 11:01:02
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