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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】过量表达一个基因，导致水稻矮化、早花、分蘖变多，如何获得相关基因？
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
以前我们实验室的做法：先查一下这个性状的出现可能与哪些基因相关，然后做个RT看这些基因的表达量有没有改变。
小小泼下冷水，转基因后出现的性状，不一定就真的是这个转基因就对水稻造成影响或联合了内源基因导致的。有可能，只是转基因的后遗症，就是说，不管转什么基因，都可能出现这种情况。所以空载体的转基因对照一定要有。
希望楼主的实验顺利，早点找到比较好的实验方法继续往下做
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你的日子如何，你的力量也必如何！
11楼2011-02-17 11:08:50
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magy2006

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2011-02-17 11:08:50:
以前我们实验室的做法：先查一下这个性状的出现可能与哪些基因相关，然后做个RT看这些基因的表达量有没有改变。
小小泼下冷水，转基因后出现的性状，不一定就真的是这个转基因就对水稻造成影响或联合了内源基因导 ...

说的非常好，感谢。不过我们的材料已经验证过是转目的基因造成的……
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12楼2011-02-17 13:15:32
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
将转入该基因的水稻和正常水稻做消减文库，可以筛选到差异表达基因，接着通过生物信息学分析可以得到基因注释，做基因层面分析，或者可以酵母双杂之类的蛋白互做研究。
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13楼2011-02-17 13:34:04
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by magy2006 at 2011-02-16 10:20:47:
通过构建超表载体，将一个基因转入水稻中，发现转基因植株早花、植株矮化、分蘖增多，初步分析这个外源基因与多个内源基因互做，造成了上述多种表型的发生，那么怎样才能分离出与此外源基因互做的内源基因呢 ？请 ...

microarray
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14楼2011-02-17 21:17:15
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asr

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
难度太大了吧。
1. 你能否确定这个表型的改变，是由于转基因引起的？
植株早花、植株矮化、分蘖增多，在转基因操作后，很容易引起这几种现象。（我是做玉米的，这几个现象比较常见）
过表达一个基因，特别是组成型表达，很有可能导致植株生长与发育的变异，产生这个现象。
2. 转基因后，外源基因的表达是否得到证实？这个基因和上述现象有何关系？表型的改变是否能够稳定遗传？
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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
15楼2013-07-03 00:24:01
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同意7楼。RNA-Seq现在很热啊

LS所提问题很关键，确实先确认这个表型是否和超表达直接相关

[ Last edited by zgb1982 on 2013-7-3 at 08:52 ]
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16楼2013-07-03 08:50:41
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zhouking8758

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做个转录谱分析，看这个基因对整个水稻其它基因转录的影响，是上调还是下调，然后确定可能与之相关的基因再来做蛋白的互作（酵母双杂等来验证）。
如果只关注与之互作的蛋白，第一，根据文献看影响这些性状的基因有哪些，一一验证。
或者通过co-ip来调取互作的蛋白，质谱鉴定。
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17楼2013-07-03 10:30:29
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个做RNA-Seq比较好 知道信息量又多 又可以分析他们与那些基因途径相关 如可以再做个酵母双杂 将这两者结果综合一块再去验证相关联的基因 这样结果就很明了啦
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18楼2013-07-04 00:19:15
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grape_vine

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得这个下游的方法可能部分程度的取决于你这个基因大体上的功能，是个转录调节的，还是一个磷酸化酶，还是一个负责合成的等等，都有相关的做法来做。
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19楼2013-07-04 08:47:23
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