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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ALP的定量检测一些问题
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】ALP的定量检测一些问题

小弟现在在做关于成骨化的一些实验，其中有一项是要检测hBMSC的ALP表达情况，由于我是将细胞接种到一种材料上面，所以在后期裂解细胞时一般都是将细胞消化下来，但我已经反反复复做过很多次了，都没办法把细胞消化下来，我想可能是材料表面存在一些孔洞，细胞长进这些孔洞里面了，所以想请教一下各位，有没有什么方法能直接把细胞裂解掉，而不用消化下来。
PS：ALP定量检测，我采用的方法是pNPP法，而且还需要通过BCA法检测其中的总蛋白质的量。
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1楼 2011-02-07 18:31:20
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jonehwa

铁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 诺曼底1227 at 2011-10-29 09:19:33:
用0.2%Triton x-100裂解细胞，同时把材料碾碎，反复吹打

你们用的是什么材料啊？我们是胶原，而且挺厚的，碾碎估计很难，还有什么好办法么？  我目前打算用triton +冻融结合，不知道效果怎么样。
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4楼2011-10-31 17:27:17
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good! 鼓励交流! 鼓励反馈！ 2011-11-01 08:48:52
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonehwa at 2011-10-28 15:12:17:
有办法了吗？

用0.2%Triton x-100裂解细胞，同时把材料碾碎，反复吹打
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-10-29 09:19:33
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-11-01 08:49:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by jonehwa at 2011-10-31 17:27:17:
你们用的是什么材料啊？我们是胶原，而且挺厚的，碾碎估计很难，还有什么好办法么？  我目前打算用triton +冻融结合，不知道效果怎么样。

胶原的确不好弄，直接冻融难道不行？
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5楼2011-11-01 08:11:09
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shenqushen

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
裂解时间是否有问题，要镜检看到细胞破碎了才好，也可加超声辅助，至于反复冻融是相对麻烦一点。
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6楼2012-07-31 08:03:19
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