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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做realtime-PCR，退火温度很重要吗？
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做realtime-PCR，退火温度很重要吗？

要做realtime-PCR，需不需要摸索最适退火温度？ 望指点
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1楼 2011-01-21 10:42:28
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adili

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
497630楼: Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-21 10:42:28:
要做realtime-PCR，需不需要摸索最适退火温度？ 望指点

需要摸索，在引物合成之后报告单上的退火温度减去3-5度，也可做个温度梯度。温度太低容易产生非特异性的扩增
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16楼2012-04-25 16:31:46
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-01-21 10:43:52:
需要

为什么呀？ 怎么摸索呢？是不是要先设个温度梯度做个半定量PCR
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3楼2011-01-21 10:46:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
非常必要摸索条件
因为退火温度能够影响特异性以及PCR效率
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4楼2011-01-21 11:09:25
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
我们实验室都没有摸索，一套程序做所有，但是有些特殊的引物，比如TM值特别的高的，还是会摸索一下提高退火温度看看，但是普通的引物我们一般都那么一套程序下来挺好的
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-01-21 12:49:23
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