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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】做realtime-PCR，退火温度很重要吗？

要做realtime-PCR，需不需要摸索最适退火温度？望指点

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1楼2011-01-21 10:42:28

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翱宇

禁虫 (正式写手)

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★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与

我在帮个国外的同学补个实验，就有16个基因的Realtime PCR,还是水稻的。第一轮只有一小半引物可以用，第二轮9个引物4个能用。水稻的GC含量很高，需要高的退火温度，我一般设计引物Tm在70度，退火温度在65度。加有5%的DMSO。

我自己的课题已经做完毕业了，是拟南芥的基因，按照以上的操作还是很好做的，一般10个基因的引物，只有一两个出现意外。