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30937747

木虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】酶切不出结果

我将一个质粒热转至E.coli中扩增后,用EcoRⅠ酶切鉴定正确.将鉴定正确的质粒电转至农杆菌,在抗性平板上筛选扩增后,提取出来的质粒用EcoRⅠ再次鉴定,却怎么也切不开,条带从质粒大小的那个地方开始就开始出现拖尾,一直拖到400bp(如果酶切正确,400bp是最小的一个片段).中间都看不到明显的条带.
请问怎么解决

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1楼 2011-01-20 14:38:41

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张曼19880101

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4.5
帖子: 73
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虫号: 1163294

★
30937747(金币+2): 谢谢.我过完年再试试 2011-01-30 09:48:31
dhd997(金币+1): 欢迎多交流 2011-02-16 10:45:00

引用回帖:

Originally posted by 30937747 at 2011-01-20 14:38:41:
我将一个质粒热转至E.coli中扩增后,用EcoRⅠ酶切鉴定正确.将鉴定正确的质粒电转至农杆菌,在抗性平板上筛选扩增后,提取出来的质粒用EcoRⅠ再次鉴定,却怎么也切不开,条带从质粒大小的那个地方开始就开始出现拖尾,一 ...

是不是质粒没提好？酶切体系的试剂用新的，再不行用双酶切试试，以前我做的时候单酶切3次都不成功，最后用双酶切就切开了~~希望对你有帮助~~~~