| 查看: 3106 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lhm_hnyj金虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】PCR引物二聚体问题 已有5人参与
|
||
|
急求帮助。下面是我的目的序列： TGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACTGGAGGGTGTGGTGGTTTCACGGCGTGACCGCCTCCGCGCTCCCGGTGCGAGGTTCTCAGCGAGCTACTGCGCAGGGGAGCCGCGGCGGGGTCGCCACTGCGTTTAGGGGGCGGCGCGGGGCCGTGACCCCCAAGGCCGGGCCCCGCCGCCGCGAGGCGGGGGGCTCGAGGGTTGAGATGACGCTCGGACAGGCATGCCCGCCAGAGTGCTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGGTTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTGCTTGCTTCTTGACTGAGAGATGCCACTGCGACAGGAGGGTCTGGGGGTCCTCCGGCGGGCGCCCTGGTCCGGGCCCTGGGGCGCCGGGGCGGTCCCGCCGAGGCAACTGCTGTGGTGTTCGCAGGGGGTTTGGGAGTGGTGACTCGATAATG；选用的引物为GTCAAGAAGCAAGCAAAGGAATC与TCAACTGGAGGGTGTGGTGG，在上述序列中已用括号隔开。我的实验目的是同属物种真伪鉴别，用这对引物只有正品获得目的条带，伪品没有，问题是均存在非特异扩增，从电泳图上来看应该是引物二聚体导致的。现在用SYBR实时荧光PCR来定性，实验结果一致，溶解曲线图谱中引物二聚体的峰明显，倒是不影响结果判断。Tm值阴性71.7°，阳性78.3与88.7°；Ct值阴性34，阳性19. 因为用探针法时间来不及，想请教大家，避免引物二聚体我该怎么将现有的引物加以改进呢；还有阴性和阳性非特异扩增的Tm值差异是什么导致的呢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有250人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】qPCR问题求助，请大家帮帮忙，谢谢
已经有5人回复
- 【求助/交流】溶解曲线法及电泳法检查引物二聚体的差异
已经有13人回复
- 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
已经有33人回复
- 【求助/交流】PCR只有引物二聚体，有图
已经有20人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
8楼2011-01-20 00:47:02
lhm_hnyj
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 156.3
- 散金: 29
- 帖子: 292
- 在线: 166.6小时
- 虫号: 801682
- 注册: 2009-07-01
- 性别: MM
- 专业: 中药检定
3楼2011-01-19 22:34:24
amilie030312
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 644.8
- 帖子: 407
- 在线: 47.3小时
- 虫号: 296900
- 注册: 2006-11-18
- 专业: 动物遗传学
4楼2011-01-19 22:43:13
lhm_hnyj
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 156.3
- 散金: 29
- 帖子: 292
- 在线: 166.6小时
- 虫号: 801682
- 注册: 2009-07-01
- 性别: MM
- 专业: 中药检定
5楼2011-01-19 22:54:46