应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
51/1返回列表
查看: 3033  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR引物二聚体问题 已有5人参与

急求帮助。下面是我的目的序列：
TGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACTGGAGGGTGTGGTGGTTTCACGGCGTGACCGCCTCCGCGCTCCCGGTGCGAGGTTCTCAGCGAGCTACTGCGCAGGGGAGCCGCGGCGGGGTCGCCACTGCGTTTAGGGGGCGGCGCGGGGCCGTGACCCCCAAGGCCGGGCCCCGCCGCCGCGAGGCGGGGGGCTCGAGGGTTGAGATGACGCTCGGACAGGCATGCCCGCCAGAGTGCTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGGTTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTGCTTGCTTCTTGACTGAGAGATGCCACTGCGACAGGAGGGTCTGGGGGTCCTCCGGCGGGCGCCCTGGTCCGGGCCCTGGGGCGCCGGGGCGGTCCCGCCGAGGCAACTGCTGTGGTGTTCGCAGGGGGTTTGGGAGTGGTGACTCGATAATG；选用的引物为GTCAAGAAGCAAGCAAAGGAATC与TCAACTGGAGGGTGTGGTGG，在上述序列中已用括号隔开。我的实验目的是同属物种真伪鉴别，用这对引物只有正品获得目的条带，伪品没有，问题是均存在非特异扩增，从电泳图上来看应该是引物二聚体导致的。现在用SYBR实时荧光PCR来定性，实验结果一致，溶解曲线图谱中引物二聚体的峰明显，倒是不影响结果判断。Tm值阴性71.7°，阳性78.3与88.7°；Ct值阴性34，阳性19.
        因为用探针法时间来不及，想请教大家，避免引物二聚体我该怎么将现有的引物加以改进呢；还有阴性和阳性非特异扩增的Tm值差异是什么导致的呢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-19 15:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1): 鼓励上图 2011-01-20 08:24:37
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2011-01-19 21:20:27:
电泳图呢？



Tm单峰的为阴性，另两个为阳性

[ Last edited by lhm_hnyj on 2011-1-19 at 22:37 ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-19 22:34:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-01-20 09:20:25
我觉得你这个阴性对照里面的引物二聚体是比较明显的，但你你怀疑的引物二聚体的位置为啥位置比较靠后啊？
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-01-19 22:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-01-19 22:43:13:
我觉得你这个阴性对照里面的引物二聚体是比较明显的，但你你怀疑的引物二聚体的位置为啥位置比较靠后啊？

是啊，缺乏这方面的理论基础，正是要向大家请教的问题之一
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-19 22:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-01-19 22:43:13:
我觉得你这个阴性对照里面的引物二聚体是比较明显的，但你你怀疑的引物二聚体的位置为啥位置比较靠后啊？

对不起，看了电泳图，发现应该是非特异性扩增，那我该咋办呢，都已经是60°退火延伸了
赞一下 回复此楼
6楼2011-01-19 23:04:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-30 13:54 by GkCVyODlx4mR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 12:13 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 11:32 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 17/850 2026-08-30 10:28 by 孤独的英雄6
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 06:10 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 06:00 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 13/650 2026-08-30 05:38 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭