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yuyan225

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以先酶切下空质粒,看看空质粒有没有问题
11楼2011-01-16 15:29:37
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姜大磊

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2011-01-16 15:29:37:
可以先酶切下空质粒,看看空质粒有没有问题

我就是切的空质粒,同时也切的目的基因,然后二者连接。
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
12楼2011-01-16 18:52:08
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yuyan225

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2011-01-16 18:52:08:

我就是切的空质粒,同时也切的目的基因,然后二者连接。

你可以找空质粒上的其他酶切位点切,先验证空质粒没问题,然后再连接
13楼2011-01-18 09:34:49
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aurosome

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
双酶切出现两条带正常啊
14楼2011-01-18 09:45:43
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wzwhq

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我感觉是你酶切的时间有点短,酶切不完全造成的,还有你用的这两种酶可以同步加到酶切体系里的,你问什么要分开切呢
15楼2011-01-18 10:31:01
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yx_sun70

金虫 (正式写手)

BL21菌株里有其他质粒


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用的BL21菌株里应该还有质粒,比如说是(DE3),现在一般用的BL21菌株中都有一个减毒质粒,可以减少外源基因的引入对宿主菌生长的影响。做酶切鉴定时,最好也从空菌里提一下他的质粒,也就是做两个对照,一个是你从大肠杆菌如dh5a中提取的质粒酶切、空bl21所提质粒酶切和转化子的酶切,只要转化子中有你要的目的地就行了。做这种转化菌的鉴定时,最好还是用PCR的方法。用酶切的方法不会有好看的图片。
16楼2011-01-18 18:50:24
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