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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒电泳，大家来看看
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yuyan225

金虫 (小有名气)
★
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可以先酶切下空质粒，看看空质粒有没有问题
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11楼2011-01-16 15:29:37
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姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2011-01-16 15:29:37:
可以先酶切下空质粒，看看空质粒有没有问题

我就是切的空质粒，同时也切的目的基因，然后二者连接。
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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
12楼2011-01-16 18:52:08
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yuyan225

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2011-01-16 18:52:08:

我就是切的空质粒，同时也切的目的基因，然后二者连接。

你可以找空质粒上的其他酶切位点切，先验证空质粒没问题，然后再连接
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13楼2011-01-18 09:34:49
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aurosome

新虫 (初入文坛)
★
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双酶切出现两条带正常啊
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14楼2011-01-18 09:45:43
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wzwhq

铁虫 (小有名气)
★
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我感觉是你酶切的时间有点短，酶切不完全造成的，还有你用的这两种酶可以同步加到酶切体系里的，你问什么要分开切呢
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15楼2011-01-18 10:31:01
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yx_sun70

金虫 (正式写手)

BL21菌株里有其他质粒

★
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你用的BL21菌株里应该还有质粒，比如说是（DE3),现在一般用的BL21菌株中都有一个减毒质粒，可以减少外源基因的引入对宿主菌生长的影响。做酶切鉴定时，最好也从空菌里提一下他的质粒，也就是做两个对照，一个是你从大肠杆菌如dh5a中提取的质粒酶切、空bl21所提质粒酶切和转化子的酶切，只要转化子中有你要的目的地就行了。做这种转化菌的鉴定时，最好还是用PCR的方法。用酶切的方法不会有好看的图片。
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16楼2011-01-18 18:50:24
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