BL21菌株里有其他质粒

11楼2011-01-16 15:29:37

姜大磊

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Originally posted by yuyan225 at 2011-01-16 15:29:37:
可以先酶切下空质粒，看看空质粒有没有问题

我就是切的空质粒，同时也切的目的基因，然后二者连接。

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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......

12楼2011-01-16 18:52:08

yuyan225

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引用回帖:

Originally posted by 姜大磊 at 2011-01-16 18:52:08:

我就是切的空质粒，同时也切的目的基因，然后二者连接。

你可以找空质粒上的其他酶切位点切，先验证空质粒没问题，然后再连接

13楼2011-01-18 09:34:49

aurosome

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双酶切出现两条带正常啊

14楼2011-01-18 09:45:43

wzwhq

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我感觉是你酶切的时间有点短，酶切不完全造成的，还有你用的这两种酶可以同步加到酶切体系里的，你问什么要分开切呢

15楼2011-01-18 10:31:01

yx_sun70

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BL21菌株里有其他质粒

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你用的BL21菌株里应该还有质粒，比如说是（DE3),现在一般用的BL21菌株中都有一个减毒质粒，可以减少外源基因的引入对宿主菌生长的影响。做酶切鉴定时，最好也从空菌里提一下他的质粒，也就是做两个对照，一个是你从大肠杆菌如dh5a中提取的质粒酶切、空bl21所提质粒酶切和转化子的酶切，只要转化子中有你要的目的地就行了。做这种转化菌的鉴定时，最好还是用PCR的方法。用酶切的方法不会有好看的图片。

16楼2011-01-18 18:50:24