应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒电泳，大家来看看
161/2返回列表12下一页
查看: 2369  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

姜大磊

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒电泳，大家来看看 已有10人参与

BL21转入pET-28a表达载体，摇菌后，提质粒，电泳总是2-3条带，原本要用回收后的质粒酶切，提了好几次，都跑不出单一的条带来。 同时，我提取质粒后，直接酶切，电泳出来结果也是好几条带，无法回收（酶切位点只有一个，并且正确选择的酶—）  请高手指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
1楼 2011-01-15 16:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-16 09:38:52
无图无真相啊  
质粒2-3条带正常  但是单酶切后如果不是一条带的话 就不正常了
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2011-01-15 17:10:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2011-01-15 17:10:52:
无图无真相啊  
质粒2-3条带正常  但是单酶切后如果不是一条带的话 就不正常了

我做的是双酶切分步酶切，Sal I 和EcoRI，分别是1.5小时和1小时，也是出来多条带，怎么回事啊，谢谢！
赞一下 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
3楼2011-01-15 17:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2011-01-16 09:38:35
引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2011-01-15 17:22:00:

我做的是双酶切分步酶切，Sal I 和EcoRI，分别是1.5小时和1小时，也是出来多条带，怎么回事啊，谢谢！

分析分析各条带的大小关系，是空载体还是有插入片段的?
再看看酶切体系和条件，EcoRI比较容易出star activity
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-01-15 22:47:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2011-01-15 22:47:07:

分析分析各条带的大小关系，是空载体还是有插入片段的?
再看看酶切体系和条件，EcoRI比较容易出star activity

质粒是空载体，我酶切后，为了连接目的基因的，切下来的片段也就6bp左右，电泳就跑没了，上楼朋友说即使单跑质粒出现2-3条带也是正常的，但是酶切后应该是单一条带，而我的酶切后2-3条带，奇怪，这样的话我无法回收做连接。
赞一下 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
5楼2011-01-16 10:35:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dream-fish

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先保证质粒是正确的，实验室有没有人成功过？其次，如果别人能成功，那考虑用他用过的酶做一次，验证你的质粒和酶是否正确。最后一招：换个公司的酶
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-01-16 11:13:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
木有图片啊
回复此楼
见得多爱的多
7楼2011-01-16 11:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dream-fish at 2011-01-16 11:13:17:
先保证质粒是正确的，实验室有没有人成功过？其次，如果别人能成功，那考虑用他用过的酶做一次，验证你的质粒和酶是否正确。最后一招：换个公司的酶

实验室以前没有用这个质粒酶切过，这种质粒是今年刚买进来的，质粒大约5.4Kbp 酶切后出来一条大的带大概符合要求，但是底下还有一条1000bp左右的带，无法解释。分步酶切的SalI和EcoRI 分别1.5h和1h
赞一下 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
8楼2011-01-16 11:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyxme
9楼2011-01-16 12:44:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zyxme at 2011-01-16 12:44:31:

你这笑···？  倒是指教一下下啊
赞一下 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
10楼2011-01-16 15:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 姜大磊 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭