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[交流]
【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
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| 我的蛋白当没有组氨酸标记时的活性很好，而加上组氨酸标记后，活性稍减弱，纯化后的条带很粗且单一，但检测不到活性，我尝试了降低诱导温度，IPTG的量，效果都不理想，能不能帮我分析分析，该怎么优化呢 |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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3楼2011-01-13 21:57:05
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rainwander(金币+2):解释的很到位，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 23:43:29
rainwander(金币+2):解释的很到位，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 23:43:29
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没有活性可能存在两种原因： 1 his tag影响了活性，尝试切除his tag后再次测定酶活。如果目前载体上没有酶切位点可以更换至有酶切位点的载体（例如pET28a N段his tag可以使用thrombin切除his tag）。或者重新构建表达载体，自己引入酶切位点。 2 如果切除了标签还是没有活性那就是蛋白本身的问题了。有些真核蛋白即使上清表达也是没有正确折叠的，或者没有进行表达后修饰，没有生物活性。这种情况就比较杯具了。 [ Last edited by 月月大可 on 2011-1-13 at 22:11 ] |
4楼2011-01-13 22:08:33
