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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请帮忙，扩增长片段基因遇到困难了
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moonblue789

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请帮忙，扩增长片段基因遇到困难了

最近扩增一个基因碰到了困难，请大家帮帮忙，出出主意，集思广益。谢谢！
基因信息：长度3400bp，GC含量56%，退火温度（Oligo软件推荐）：59.8度。
做过温度梯度（56度到62度），用过GC buffer，也改变镁离子浓度（2.5mM）,用过某公司的Super Taq，也用过罗氏的扩增长片段的酶，都无能无力。
请各位帮忙了，谢谢！
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1楼2011-01-12 19:10:19
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★ ★
moonblue789(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 00:11:28
moonblue789(金币+2):谢谢！模板没问题，PCR体系没问题，现在就只能考虑引物了 2011-01-13 08:43:08
你是扩增不出来还是怎么回事？
3400真不算长的片段，
首先你得确定你的模板没有问题，扩个内参基因当做对照，如果是模板有问题，你怎么改变体系都是扩不出来的
其次，确定你的PCR体系是正确的，别少加东西了
再次，确定你的引物是否合适
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6楼2011-01-12 22:16:19
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luzeyan

金虫 (小有名气)
★
moonblue789(金币+1):谢谢参与
moonblue789(金币+2):引物没换过，模板换过的。谢谢！ 2011-01-12 19:49:25
引用回帖:
Originally posted by moonblue789 at 2011-01-12 19:10:19:
最近扩增一个基因碰到了困难，请大家帮帮忙，出出主意，集思广益。谢谢！
基因信息：长度3400bp，GC含量56%，退火温度（Oligo软件推荐）：59.8度。
做过温度梯度（56度到62度），用过GC buffer，也改变镁离子 ...

1.引物有没有问题？
2.换一个模板做做
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2楼2011-01-12 19:38:21
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
moonblue789(金币+1):谢谢参与
moonblue789(金币+1):是扩增不出来！ 2011-01-13 08:44:57
是量少呀还是不扩增呀？
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3楼2011-01-12 20:07:56
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
moonblue789(金币+1):谢谢参与
是什么材料啊也没说。
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4楼2011-01-12 20:23:46
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