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【求助/交流】请帮忙,扩增长片段基因遇到困难了
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moonblue789
金虫
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虫号: 997559
[交流]
【求助/交流】请帮忙,扩增长片段基因遇到困难了
最近扩增一个基因碰到了困难,请大家帮帮忙,出出主意,集思广益。谢谢!
基因信息:长度3400bp,GC含量56%,退火温度(Oligo软件推荐):59.8度。
做过温度梯度(56度到62度),用过GC buffer,也改变镁离子浓度(2.5mM),用过某公司的Super Taq,也用过罗氏的扩增长片段的酶,都无能无力。
请各位帮忙了,谢谢!
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2011-01-12 19:10:19
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ma2007
银虫
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在线: 21.2小时
虫号: 442272
用KOD试试
★
moonblue789(金币
+1
):谢谢参与
moonblue789(金币+2): 2011-01-13 08:41:59
用东洋纺的KOD酶试试,这个酶比较强悍,我们实验室常用。
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5楼
2011-01-12 21:46:44
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luzeyan
金虫
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虫号: 990474
★
moonblue789(金币
+1
):谢谢参与
moonblue789(金币+2):引物没换过,模板换过的。谢谢! 2011-01-12 19:49:25
引用回帖:
Originally posted by
moonblue789
at 2011-01-12 19:10:19:
最近扩增一个基因碰到了困难,请大家帮帮忙,出出主意,集思广益。谢谢!
基因信息:长度3400bp,GC含量56%,退火温度(Oligo软件推荐):59.8度。
做过温度梯度(56度到62度),用过GC buffer,也改变镁离子 ...
1.引物有没有问题?
2.换一个模板做做
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2楼
2011-01-12 19:38:21
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bigboy123
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★
moonblue789(金币
+1
):谢谢参与
moonblue789(金币+1):是扩增不出来! 2011-01-13 08:44:57
是量少呀还是不扩增呀?
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3楼
2011-01-12 20:07:56
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zgb1982
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★
moonblue789(金币
+1
):谢谢参与
是什么材料啊也没说。
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4楼
2011-01-12 20:23:46
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