| 查看: 4362 | 回复: 26 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
wangdandelia木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】DNA退火 已有7人参与
|
||
|
大家谁做过单链DNA片段退火，形成双链的实验呢？还有DNA的磷酸化，都需要注意哪些问题？ 我做了很多歌DN片段的退火和磷酸化，在确定载体没有问题的情况下，都不能与退火形成的DNA双链连接，哪个细节出错了呢。。。 我是先进行DNA退火，然后再将退火后的双链DNA进行磷酸化，具体步骤如下： 退火体系： 100pmol/uL的互补DNA单链各自加入10uL，再加入去离子水80uL，组成了100uL的体系，混匀，在PCR仪中退火，退火步骤如下：95摄氏度3min；每8s降低0.1摄氏度，降至25摄氏度，然后4摄氏度长期保存。 退火后的双链DNA进行磷酸化，用的是NEB公司的T4 多聚核苷酸激酶，是50uL体系：加入激酶Buffer 5 uL， DNA 15uL， T4多聚核苷酸激酶1 uL，ddH2O 29uL， 于37℃ 温育30min， 然后65℃ 20min 热失活。 以上是我的具体实验步骤，谢谢！ [ Last edited by wangdandelia on 2011-1-10 at 09:27 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有73人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊
已经有26人回复
- 转基因植株的RT-PCR结果分析
已经有8人回复
- 合成一段DNA的问题？引物，PCR
已经有13人回复
- 急救啊！各位大虾，PCR扩基因有杂带(有图)！
已经有11人回复
- DNA双酶切后在两端加adapter的连接问题
已经有7人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 玉米转基因植株的检测中遇到的问题
已经有10人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 求DNA退火步骤
已经有15人回复
- 转基因植株DNA PCR检测要不就不出带，要不就连水和阴性对照都出带？？？急急急！！！
已经有10人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已经有20人回复
wangdandelia
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1680.3
- 散金: 112
- 红花: 3
- 帖子: 505
- 在线: 91.1小时
- 虫号: 474840
- 注册: 2007-12-06
- 专业: 环境微生物学
7楼2011-01-10 11:13:57
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2011-01-09 23:43:55
jinhx87
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 28184.7
- 红花: 6
- 帖子: 6691
- 在线: 1213.2小时
- 虫号: 81315
- 注册: 2005-07-19
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2011-01-10 06:57:52
wangdandelia
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1680.3
- 散金: 112
- 红花: 3
- 帖子: 505
- 在线: 91.1小时
- 虫号: 474840
- 注册: 2007-12-06
- 专业: 环境微生物学
4楼2011-01-10 09:10:13
