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congyunxy

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[交流] 【求助/交流】长片段PCR已有7人参与

现在正在扩增一个长约2800左右的基因，大家有什么好的建议吗？我是要构建这个基因的真核表达载体，所以不能有突变的位点。

[ Last edited by congyunxy on 2011-1-10 at 13:21 ]

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1楼2011-01-08 11:34:26

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congyunxy

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引用回帖:

Originally posted by HO-1 at 2011-01-08 14:59:30:
用TAKARA的LA Taq酶，我觉得挺好用的！

现在我就用的这个酶，但是非特异性扩增很多。用primer5设计引物，满足条件的引物不多，于是在引物中修改了几个碱基为了使上下游引物Tm值相近（引物是在起始密码子之前和终止密码子之后设计的）。能扩出目的片段，由于杂带多，于是以扩出来目的带的那一管PCR产物为模板，但是非特异性的带出来了，特异性的带没了。