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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】生物合成基因簇的克隆方法
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weekend883

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】生物合成基因簇的克隆方法 已有5人参与

目前，正在从事生物合成基因簇的克隆，想请教下各位大侠，除了用筛选文库的方法获得片段，另外，还有没有其它更简便的方法啊？可不可以用PCR的方法呢？谢谢！

PS:目的片段大约40Kb
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1楼 2011-01-07 09:54:16
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
1949stone:我也想知道 2011-01-07 15:25:21
40k怎么扩啊
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小木虫之有关部门负责人
2楼2011-01-07 12:25:56
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
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引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-01-07 12:25:56:
40k怎么扩啊

哈哈，同问：40Kb怎么P出来？

还是想想别的办法吧
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
3楼2011-01-07 21:22:54
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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lstt09nk(金币+2):很积极 2011-01-12 11:41:03
引用回帖:
Originally posted by weekend883 at 2011-01-07 09:54:16:
目前，正在从事生物合成基因簇的克隆，想请教下各位大侠，除了用筛选文库的方法获得片段，另外，还有没有其它更简便的方法啊？可不可以用PCR的方法呢？谢谢！

PS:目的片段大约40Kb

分段扩增的方法可以一试，然后每段都测序，拼接序列就OK了。如果想将这么长的片段连接到载体上是很难实现的，我所知道的就是克隆和杂交同时使用的方法效率高了。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2011-01-07 22:23:24
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weekend883

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-07 22:23:24:



分段扩增的方法可以一试，然后每段都测序，拼接序列就OK了。如果想将这么长的片段连接到载体上是很难实现的，我所知道的就是克隆和杂交同时使用的方法效率高了。

谢谢你的建议，还有两个小问题想请教下：克隆和杂交同时使用，应该怎么做呢？分段扩的话，引物应该怎么设计呢？
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5楼2011-01-12 10:52:05
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brightfuture01

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lstt09nk(金币+1):鼓励下 2011-01-12 11:41:20
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Originally posted by weekend883 at 2011-01-12 10:52:05:



谢谢你的建议，还有两个小问题想请教下：克隆和杂交同时使用，应该怎么做呢？分段扩的话，引物应该怎么设计呢？

呵呵，建个小的文库，然后设计探针杂交。有信号的克隆可以直接测序。不过你的片段很大，可能得构建粘粒文库或者柯斯质粒文库。

如果不想建库的话，只能通过genome walking 的方法一步一步慢慢拿。
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6楼2011-01-12 11:10:04
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weekend883

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-12 11:10:04:



呵呵，建个小的文库，然后设计探针杂交。有信号的克隆可以直接测序。不过你的片段很大，可能得构建粘粒文库或者柯斯质粒文库。

如果不想建库的话，只能通过genome walking 的方法一步一步慢慢拿。

嗯，好的，谢谢你的建议，您知不知道现在有没有公司提供基因组文库构建的服务呢？
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7楼2011-01-12 11:11:53
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brightfuture01

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Originally posted by weekend883 at 2011-01-12 11:11:53:



嗯，好的，谢谢你的建议，您知不知道现在有没有公司提供基因组文库构建的服务呢？

TaKaRa、生工等公司貌似都有类似服务。
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8楼2011-01-12 11:15:30
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weekend883

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-12 11:15:30:


TaKaRa、生工等公司貌似都有类似服务。

谢谢，我去问下，主要是构建文库需要时间太久了，自己染色体步移的话，需要的时间久不久呢？
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9楼2011-01-12 11:26:16
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brightfuture01

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Originally posted by weekend883 at 2011-01-12 11:26:16:


谢谢，我去问下，主要是构建文库需要时间太久了，自己染色体步移的话，需要的时间久不久呢？

运气很重要，嘿嘿。
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10楼2011-01-12 11:57:18
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