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wmqouc

金虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】求助制备有活性烟草蚀斑病毒(TEV)酶的方法

各位大侠:
本人最近用大肠杆菌表达烟草蚀斑病毒(TEV)酶,蛋白表达出来了,纯度浓度都很高,
但是TEV酶切效率很低。
我的制备过程如下:大肠杆菌培养基是TB 培养基,37摄氏度培养至对数期后降温至18度,加入终浓度0.5mM的IPTG,继续培养20小时后收菌。超声破碎后纯化过程在冰水混合物中进行。
请问各位大侠用的什么培养基?以及用什么培养纯化条件。
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198619

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
是啊!我最近也在作TEV切蛋白了,可是老是切不动,TEV纯化效果还不错。浓度也不错的。可就是切不动我的目的蛋白。请指教!谢谢!
19楼2011-12-16 10:02:55
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wmqouc

金虫 (著名写手)


自己顶一下
别沉了
2楼2011-01-07 09:06:07
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laoshu16

银虫 (小有名气)



rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-07 21:35:13
wmqouc(金币+1): 2011-01-09 11:38:33
我也在做TEV 我用的是LB培养基 活性不好是不是破碎细胞时间过长或者打出气泡了 或者你的酶切条件不是它的最佳条件
3楼2011-01-07 10:32:46
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wmqouc

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by laoshu16 at 2011-01-07 10:32:46:
我也在做TEV 我用的是LB培养基 活性不好是不是破碎细胞时间过长或者打出气泡了 或者你的酶切条件不是它的最佳条件

请问“打出气泡”意味着什么?
你用LB培养基,培养和诱导的条件是什么?
谢谢!
4楼2011-01-09 11:40:30
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