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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助制备有活性烟草蚀斑病毒(TEV)酶的方法
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wmqouc

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助制备有活性烟草蚀斑病毒(TEV)酶的方法

各位大侠：
本人最近用大肠杆菌表达烟草蚀斑病毒(TEV)酶，蛋白表达出来了，纯度浓度都很高，
但是TEV酶切效率很低。
我的制备过程如下：大肠杆菌培养基是TB 培养基，37摄氏度培养至对数期后降温至18度，加入终浓度0.5mM的IPTG，继续培养20小时后收菌。超声破碎后纯化过程在冰水混合物中进行。
请问各位大侠用的什么培养基？以及用什么培养纯化条件。
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1楼 2011-01-06 18:47:21
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laoshu16

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wmqouc at 2011-01-13 15:09:03:

谢谢回复！
我一般是将菌液收后先在液氮冻住，然后冻于-80度冰箱，第二天或过几天再纯化蛋白。
看来今后我应该收菌后接着做。
还有我上次纯化TEV时，在超声破碎时加入了PMSF，下次做就不加PMSF了，怕抑制蛋白 ...

你说的是摩尔比吗 酶活这么高
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15楼2011-01-17 15:55:14
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wmqouc

金虫 (著名写手)
自己顶一下
别沉了
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2楼2011-01-07 09:06:07
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laoshu16

银虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-07 21:35:13
wmqouc(金币+1): 2011-01-09 11:38:33
我也在做TEV 我用的是LB培养基 活性不好是不是破碎细胞时间过长或者打出气泡了 或者你的酶切条件不是它的最佳条件
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-07 10:32:46
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wmqouc

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by laoshu16 at 2011-01-07 10:32:46:
我也在做TEV 我用的是LB培养基 活性不好是不是破碎细胞时间过长或者打出气泡了 或者你的酶切条件不是它的最佳条件

请问“打出气泡”意味着什么？
你用LB培养基，培养和诱导的条件是什么？
谢谢！
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4楼2011-01-09 11:40:30
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