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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】感受态细胞制备
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yabing0324

金虫 (职业作家)

[交流] 【求助】感受态细胞制备

大家好！
我在震荡培养至OD600到0.5，后，分装到4个50ml离心管中，按照步骤要冰上放置10分钟，然后离心收集菌体，但是，由于离心机出了点问题，耽误了四十分钟，就是说在冰上放置了将近一个小时，才离心的，呜哇哇，不知道影响大吗？

[ Last edited by rainwander on 2011-1-6 at 17:40 ]
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1楼 2011-01-06 16:28:26
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yabing0324

金虫 (职业作家)
★
翱宇(金币+1):你的这些基本上很详细了，我给你个补充的建议是分装后，放于液氮速冻后再保持至负70度 2011-01-06 22:02:48
引用回帖:
Originally posted by 最爱花诗雨 at 2011-01-06 18:29:57:
嗯 嗯，40分钟问题不大，有文献报道化转法，冰上放置6h效果最好，呵呵，不知道你用的是什么转化方法，离心机出问题，记得先预冷，不然影响很大哦

用CaCl2 的方法
先冰上放置10分钟，4度离心，收集菌体，加冰冷氯化钙悬浮，再4度离心，加含15%甘油的氯化钙，冰上放置8分钟，分装
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6楼2011-01-06 21:56:22
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susizheng

木虫 (著名写手)
yabing0324(金币+3):又快又好！ 2011-01-06 16:39:08
冰上放置时间越长越好。
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2楼2011-01-06 16:30:14
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
rainwander(金币+2):恩，多少会有一点点影响的，问题应该不大~~~ 2011-01-06 17:41:47
yabing0324(金币+1): 2011-01-06 21:59:23
引用回帖:
Originally posted by yabing0324 at 2011-01-06 16:28:26:
大家好！
我在震荡培养至OD600到0.5，后，分装到4个50ml离心管中，按照步骤要冰上放置10分钟，然后离心收集菌体，但是，由于离心机出了点问题，耽误了四十分钟，就是说在冰上放置了将近一个小时，才离心的，呜哇 ...

一般要求冰上放置30min，但是楼上说“冰上放置时间越长越好”令人费解，若冰上放置1h应该也没有什么问题，具体有没有影响可以做个试验对照一下看看，我觉得只是在冰上放置的过程中菌体仍在生长增值，OD值会变大一点点！
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3楼2011-01-06 17:25:59
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-06 21:20:58
yabing0324(金币+1): 2011-01-06 21:59:31
嗯 嗯，40分钟问题不大，有文献报道化转法，冰上放置6h效果最好，呵呵，不知道你用的是什么转化方法，离心机出问题，记得先预冷，不然影响很大哦
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4楼2011-01-06 18:29:57
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