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xiajing_acm

新虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】紧急求助：western分离胶浓度怎么确定？

各位大侠：
小弟我最近要做western，因为是新手，关于分离胶浓度与蛋白大小的关系不太了解，要做的蛋白分子量是18KD、34KD、42KD及49KD，还有一个119KD，劳驾各位大侠指点一下，我该用多大的分离胶跑比较合适一点呢？谢谢！

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1楼 2011-01-05 21:10:08

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huiqing719

银虫 (初入文坛)

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★ ★
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
novus(金币+1): 谢谢交流！ 2011-03-02 21:10:31
xiajing_acm(金币+2): 2011-03-03 20:22:11
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-08 09:36:43
xiajing_acm(金币+4): 2011-04-29 15:35:11

引用回帖:

Originally posted by xiajing_acm at 2011-01-05 21:10:08:
各位大侠：
小弟我最近要做western，因为是新手，关于分离胶浓度与蛋白大小的关系不太了解，要做的蛋白分子量是18KD、34KD、42KD及49KD，还有一个119KD，劳驾各位大侠指点一下，我该用多大的分离胶跑比较合适 ...

一般来说，蛋白分子量越小需要胶的浓度越大，140-80kDa的多用8%d
80-25kDa的用10%， 40-15的用12%的，＜20的用15%。我建议你用10%左右的，根据蛋白分子量的大小越大的蛋白转膜时所用的时间也越长，但是也不能太久都则会转透到滤纸上。我也是新手只能提供这些了如果有什么不妥的地方还请原谅。