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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】紧急求助：western分离胶浓度怎么确定？
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xiajing_acm

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】紧急求助：western分离胶浓度怎么确定？

各位大侠：
    小弟我最近要做western，因为是新手，关于分离胶浓度与蛋白大小的关系不太了解，要做的蛋白分子量是18KD、34KD、42KD及49KD，还有一个119KD，劳驾各位大侠指点一下，我该用多大的分离胶跑比较合适一点呢？谢谢！
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1楼 2011-01-05 21:10:08
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ycbbingbing

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
18KD、34KD、42KD及49KD，还有一个119KD
18,34KD------12%
42KD,49kD-------10%
119KD-------8%
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11楼2011-09-01 20:28:26
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胖学长

金虫 (小有名气)
★
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
我不知道  有机会帮你问问
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3楼2011-02-28 21:18:18
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huiqing719

银虫 (初入文坛)
★ ★
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
novus(金币+1): 谢谢交流！ 2011-03-02 21:10:31
xiajing_acm(金币+2): 2011-03-03 20:22:11
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-08 09:36:43
xiajing_acm(金币+4): 2011-04-29 15:35:11
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2011-01-05 21:10:08:
各位大侠：
    小弟我最近要做western，因为是新手，关于分离胶浓度与蛋白大小的关系不太了解，要做的蛋白分子量是18KD、34KD、42KD及49KD，还有一个119KD，劳驾各位大侠指点一下，我该用多大的分离胶跑比较合适 ...

一般来说，蛋白分子量越小 需要胶的浓度越大，140-80kDa的多用8%d
80-25kDa的用10%， 40-15的用12%的， ＜20的用15%。我建议你用10%左右的，根据蛋白分子量的大小 越大的蛋白转膜时所用的时间也越长，但是也不能太久 都则会转透到滤纸上。我也是新手 只能提供这些了 如果有什么不妥的地方 还请原谅。
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4楼2011-03-02 15:34:52
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