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mbright

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】【求助/交流】蛋白质电泳求助 已有3人参与

我要细胞破碎后进行蛋白质电泳。我用溶菌酶作用细胞后,再用上清液再进行蛋白质电泳,跑不出来带。是否是溶菌酶作用细胞后,细胞本身的蛋白酶会释放出来,降解其它蛋白。我想换一种其他的细胞破碎方法。用抽提DNA的裂解液裂解细胞后,再离心用上清液来蛋白质电泳是否可以?另外,我在网上搜索到下面一种方法,不知是否可行:如果是做小量菌液,跑PAGE胶看其表达情况的话,可以直接加蛋白loading buffer煮沸5分钟即可,需注意的是上样前要离心12000rpm至少5分钟,然后上样时,枪头别吸最底下的。
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-02 13:14:40
跑SDS-PAGE的话直接用菌体,不需要破碎细胞,方法就是你说的:发酵液离心收集菌体,直接加蛋白loading buffer煮沸3-5分钟,上样前要离心12000rpm至少5分钟,取上清上样,注意不要吸到沉淀即可。
3楼2011-01-02 10:08:02
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jhon86

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-02 13:14:30
http://bbs.biogo.net/simple/?t166360.html
这上面应该可以帮助你解决……
2楼2011-01-01 23:14:59
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