应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】WB老做不出来
71/1返回列表
查看: 1717  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

水水726

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】WB老做不出来 已有4人参与

最近开始做WB，先用Tublin练手，但是老是做不出来，郁闷！
  分离胶是10%，浓缩胶5%，电泳：80V半小时至分离胶，120v一个半小时分  
  离。
  转膜:湿转300mA，2小时
  第一次用了回收的一抗出现3条带，后来换了新的一抗，出现2条条带，郁闷，不知道为什么？？？求高手指点，注：一抗是单克隆抗体，从别的实验室分装了10ul拿过来用的。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-01 21:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2011-01-01 22:32:04
你上蛋白marker了吗？tublin是对照，一般能做出来的，几条带倒是无所谓，主要是对照蛋白marker看你要的条带出现了否，
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-01-01 21:49:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpuyao

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):鼓励交流 2011-01-01 22:32:23
条件还是可以的，别的实验室用此抗体是单一条带嘛，蛋白是否降解了呢？注意蛋白提取的过程要全部冰上操作及避免蛋白反复冻融
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-01-01 22:21:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-01 22:32:38
没做过WB，不知道微管蛋白的性质 .但是看文章有多条带，有可能是多聚体
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-01-01 22:32:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水水726

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cpuyao at 2011-01-01 22:21:32:
条件还是可以的，别的实验室用此抗体是单一条带嘛，蛋白是否降解了呢？注意蛋白提取的过程要全部冰上操作及避免蛋白反复冻融

蛋白没有降解，我的蛋白样品在其他实验室验证了下，没有问题
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-01 22:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水水726

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-01 21:49:54:
你上蛋白marker了吗？tublin是对照，一般能做出来的，几条带倒是无所谓，主要是对照蛋白marker看你要的条带出现了否，

问题是不该出现非特异性结合条带啊，marker是上了。。。
赞一下 回复此楼
6楼2011-01-01 22:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpuyao

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):鼓励交流 2011-01-02 13:16:55
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-01-01 22:58:12:

问题是不该出现非特异性结合条带啊，marker是上了。。。

单克隆抗体也是可能出现非特异条带的，如蛋白降解或者产生多聚体，既然蛋白没问题可能是一抗质量不好，楼主可以适当延长封闭时间，或者增加一抗稀释比例试一试，个人意见，仅供参考^^祝好运
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-01-02 00:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 水水726 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 13:44 by winsaint
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭