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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】聚乙二醇在连接反应中的作用
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】聚乙二醇在连接反应中的作用 已有4人参与

大家有没有在平末端连接反应体系中加入过聚乙二醇8000呢？
效果好不好啊？
应该加入多少聚乙二醇呢？
对后续的转化有没有影响？
我的是T4DNA连接酶，连接质粒载体和小DNA片段。
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1楼 2010-12-30 17:12:14
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-30 20:38:05:

哦，好的，谢谢哦~
呵呵，那你们的连接条件是多少度呢？连接多长时间？还有载体与短片段DNA的比例是大约多少？
莫怪我问题多呀，O(∩_∩)O~

如果你想过夜连的话可以在16度，如果想更久的话就放在4度。我们一般就在16度过夜，做不出来才考虑长时间4度连接。

外源DNA与载体DNA的摩尔比为10：1，记得是摩尔比哈，不是质量比。这个比例还可以加大。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2010-12-30 20:40:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享 2010-12-30 17:51:45
连接酶我现在都用那种预混好的mix
就是酶和buffer预混在一起的，直接加入到质粒和片段的混合液就好了~

没试过聚乙二醇
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2楼2010-12-30 17:17:03
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 17:17:03:
连接酶我现在都用那种预混好的mix
就是酶和buffer预混在一起的，直接加入到质粒和片段的混合液就好了~

没试过聚乙二醇

请问你用的是哪个公司的mix啊？连接平末端效率怎样？
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3楼2010-12-30 17:42:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享 2010-12-30 17:52:02
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-30 17:42:20:

请问你用的是哪个公司的mix啊？连接平末端效率怎样？

平端连接对底物浓度及酶的浓度要求比较高，可以用NEB或者Promega的连接酶，TaKaRa的T4就算了。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-12-30 17:45:15
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