【求助/交流】pcr的奇怪现象 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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cyz20050505

木虫 (正式写手)

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dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-31 08:51:20

首先你没有其他证据表明你所谓的那个结果是你用的那一条引物P出来的，后来你又P不出来了，所以很可能不是那单一条引物P的结果。实际上，只用一个引物进行PCR扩增反应不是什么奇怪的事情，比如ISSR分子标记，就是只用一个引物扩增。

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11楼2010-12-29 18:11:10

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xiaoqi708

木虫 (正式写手)

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先检查一下模板是不是不有问题，然后看看引物有没有讲解，个人认为这个可能是主要问题。

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12楼2010-12-29 19:48:11

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fang8596

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引物4度保存，会很快降解的～

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13楼2010-12-30 15:24:08

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zhangxn2010

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让一切随风飞翔

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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-31 08:51:40

引物和基因组时间长了会降解，再加上体系不是最适，不出来是很正常的

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一直向前！

14楼2010-12-30 16:32:36

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西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-31 08:51:50

楼主模板么得问题吧。保存杀的最重要。只不过运气也很重要阿……

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快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913

15楼2010-12-31 00:22:08

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wangy0908

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模板可能降解

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16楼2010-12-31 01:01:29

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rioarsenal

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引用回帖:

Originally posted by 513279618 at 2010-12-28 17:37:30:
我现在做pcr，发现原来我能用一个引物p出结果，且结果很好，一段时间后，用同样的引物在同样的条件下p同样的模板就p不出来了。那是为什么呢？没道理啊！

PCR管里的每一种成分对结果都可能有影响。

另外，实验操作和环境条件，还有仪器的稳定性，都会有影响。

楼主没做过对照么？

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17楼2010-12-31 04:58:08

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haitian0625

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我们实验室也有，不过现在是将Mg、dNTP、Buf混成Mixture，再建体系加水、引物、模板。

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18楼2010-12-31 12:27:03

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tanxi125

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一换一套酶，再试一下，也可能你第一次扩出来的只是运气好，如果是长片段的话，最好用LAtaqE

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什么都得靠自己！我现在深刻理解！

19楼2011-01-07 12:17:50

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caohui

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我之前P一序列也P不出来然后把引物和真个体系换成新的就出来结果了

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抬头看看蓝天，放飞梦想！

20楼2011-01-08 19:48:47

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