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王庭

木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助】多孔材料中细胞全液的提取方法

我主要是做生物材料偏颇于生物检测这块的。为了将材料上的细胞和培养瓶中的细胞生长状况进行大分子方面的对比，就需要得到全细胞提取液以及RNA等。但是我在多孔材料中培养的细胞，粘附性太好了，导致用胰酶很难清洗下来，又不能消化太久，所以也就很难得到全细胞提取液，我尝试在材料中破碎细胞直接进行全液提取，可是结果也不太好。哪位正在做，或者头脑极为强大的大侠给出出主意啊，感激涕零哦~~~Sample Text

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1楼 2010-12-27 20:09:55

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王庭

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

Originally posted by dhd997 at 2011-01-08 21:55:58:
用细胞裂解液试试，把细胞全部裂解。

我之前确实也尝试了这个方法，当然这个方法也在我所有方法里面相对来说是最好的一个。只是由于是多孔材料，在清洗上面的培养液的时候不能像常规提取蛋白的方法那样可以PBS清洗、Washing buffer 清洗等等进行一系列的步骤，导致清洗不净，所以提出的蛋白含有一些培养液杂质；另外，裂解液用的量比较多，浪费倒是先不说了，呵呵只是得到的蛋白浓度相对太低，WB都没有办法检测了。。。持续纠结中啊。。不过这个方法应该还是有潜力改进的。