应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量pcr求助
51/1返回列表
查看: 3309  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr求助

最近刚刚做荧光定量，但是结果总是不好，有一点就是老达不到平台期，已经40个循环了，模板量已经加到2ul(20ul体系)，但还是不行，不知道是为什么，达不到平台期出来模板量低不知道还有没有其他原因？请各位能帮忙分析下，谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-23 14:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovenlong

铜虫 (小有名气)

好似你的体系有问题哦！

lianyi1989(金币+1): 2010-12-28 10:56:23
1.楼主的体系用的模板量是多少？各个反应管是否一致?按照标准的PCR体系来配，同时结合你用的试剂说明书来配体系，一般不会有太大问题。我做的10微升的体系一般10~30ng的模板就够了。
2.达不到平台期，有时候很难讲清楚原因的。可能你同样的体系有时能行有时又不行，细节不好把握。我上个月58度退火做得很好，昨天就不行了，今天换57度退火做了两次，第二次才行，不知道为啥。
3.最好是先做个梯度摸一摸退火温度，不然就来个Touch Down吧。个人感觉退火温度经常是没P好的主要原因。至于镁离子什么的定量可以少去考虑。
4.先配反应母液再分装，做三个以上重复测试体系可能会对你的实验有好处，特别是你以后做着做着老出问题的时候很烦的。

补充：如果PCR达不到平台期，定量结果很难看的，基本上没用。。。

[ Last edited by lovenlong on 2010-12-27 at 14:37 ]
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-12-27 14:36:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

love_st

金虫 (著名写手)
lianyi1989(金币+1): 2010-12-23 19:33:35
上图呗，还有，为什么非得到平台，只要有平台的趋势就可以了
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-23 16:52:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在雨中

金虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-23 18:54:35
lianyi1989(金币+1): 2010-12-23 19:33:40
我曾经碰到过类似的问题。
如果你的模板没有问题的话，是不是可以考虑下你的PCR mix的质量。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-12-23 18:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2010-12-23 16:52:56:
上图呗，还有，为什么非得到平台，只要有平台的趋势就可以了

就是到最后指数期还没完呢~这结果肯定没法用啊
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-23 19:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dashu-973326楼
2010-12-23 21:04   回复  
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:23 by o3EMxHUAQDtS
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:12 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭