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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴

为了将两对引物扩增后,电泳跑的条带区分开,我想在其中一条引物的5'端挂一段其他物种的序列,但是不知道怎么找这样的序列?
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1楼 2010-12-17 20:25:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2010-12-17 21:25:40:

是这样的,这两对引物扩增的产物大小是一样的,我想在其中一条引物上加个尾巴之类的,已达到在电泳时候在同一泳道上能区分开条带的目的?

首先这个产物的片段不能太大，我估计假设200bp以下应该能做到

很简单，把其中一对引物接长，无论什么序列都可以，你可以大胆地各接长10nt

然后只能跑PAGE胶了，因为琼脂糖分50bp以下的条带就很困难了，容易误判

现在你只是差别20bp。再长可能会严重影响扩增效率
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8楼2010-12-18 10:02:46
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
神马？看不懂你的问题~~能不能详细解释下实验目的
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2楼2010-12-17 20:56:44
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
或者我理解的不对， 能不能一次扩增一个引物？
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3楼2010-12-17 20:58:38
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-12-17 20:58:38:
或者我理解的不对， 能不能一次扩增一个引物？

这个当然是可以的,我只是想优化下,争取一次PCR 加一次电泳 就可以区分开条带...
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4楼2010-12-17 21:22:59
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