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xwsooo

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴

为了将两对引物扩增后,电泳跑的条带区分开,我想在其中一条引物的5'端挂一段其他物种的序列,但是不知道怎么找这样的序列?
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xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-12-17 22:53:01:


这个看你目的片段多大以及跑什么样的胶了。因为引物上虽然可以附加序列,但是毕竟就那么几十bp,如果本身片段好几百上k,跑的是琼脂糖胶的话,附加的这点长度肯定看不出来或者很难分辨。要是本身扩增的条带很 ...

我明白您的意思,重新设计引物我也想过,但是这引物真不好弄到合适的,在primer-blast特异性好的就找到现在这样的了,我的目的产物在140bp 左右,跑琼脂糖凝胶。。。这尾巴的长度应该有所限制吧?怎么样设计才不影响引物本身,又不会使这 尾巴与目的序列以外的片断非特异性结合呢??/
7楼2010-12-18 09:46:47
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神马?看不懂你的问题~~能不能详细解释下实验目的
2楼2010-12-17 20:56:44
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


或者我理解的不对, 能不能一次扩增一个引物?
3楼2010-12-17 20:58:38
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xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-12-17 20:58:38:
或者我理解的不对, 能不能一次扩增一个引物?

这个当然是可以的,我只是想优化下,争取一次PCR 加一次电泳 就可以区分开条带...
4楼2010-12-17 21:22:59
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