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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴

为了将两对引物扩增后,电泳跑的条带区分开,我想在其中一条引物的5'端挂一段其他物种的序列,但是不知道怎么找这样的序列?
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1楼 2010-12-17 20:25:01
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-12-17 22:53:01:


这个看你目的片段多大以及跑什么样的胶了。因为引物上虽然可以附加序列，但是毕竟就那么几十bp，如果本身片段好几百上k，跑的是琼脂糖胶的话，附加的这点长度肯定看不出来或者很难分辨。要是本身扩增的条带很 ...

我明白您的意思，重新设计引物我也想过，但是这引物真不好弄到合适的，在primer-blast特异性好的就找到现在这样的了，我的目的产物在140bp 左右，跑琼脂糖凝胶。。。这尾巴的长度应该有所限制吧？怎么样设计才不影响引物本身，又不会使这 尾巴与目的序列以外的片断非特异性结合呢？？/
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7楼2010-12-18 09:46:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
神马？看不懂你的问题~~能不能详细解释下实验目的
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2楼2010-12-17 20:56:44
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
或者我理解的不对， 能不能一次扩增一个引物？
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3楼2010-12-17 20:58:38
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-12-17 20:58:38:
或者我理解的不对， 能不能一次扩增一个引物？

这个当然是可以的,我只是想优化下,争取一次PCR 加一次电泳 就可以区分开条带...
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4楼2010-12-17 21:22:59
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