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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在5'端挂一个尾巴

为了将两对引物扩增后,电泳跑的条带区分开,我想在其中一条引物的5'端挂一段其他物种的序列,但是不知道怎么找这样的序列?
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1楼 2010-12-17 20:25:01
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yydopcr

铜虫 (小有名气)
xwsooo(金币+1):谢谢 2010-12-18 15:47:08
有点儿问题，第一加了之后引物变长，很容易有不可预测的二聚体和非特异扩增。其次琼脂糖电泳虽然理论可以分开，但是实际操作有难度，聚丙烯酰胺凝胶电泳倒是可以。
如果实验室有条件，建议用real-time吧看melting curve，用sybegreen 或者syto9，很经济的
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2010-12-17 20:25:01:
为了将两对引物扩增后,电泳跑的条带区分开,我想在其中一条引物的5'端挂一段其他物种的序列,但是不知道怎么找这样的序列?

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12楼2010-12-18 13:05:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
神马？看不懂你的问题~~能不能详细解释下实验目的
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2楼2010-12-17 20:56:44
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
或者我理解的不对， 能不能一次扩增一个引物？
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3楼2010-12-17 20:58:38
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-12-17 20:58:38:
或者我理解的不对， 能不能一次扩增一个引物？

这个当然是可以的,我只是想优化下,争取一次PCR 加一次电泳 就可以区分开条带...
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4楼2010-12-17 21:22:59
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