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nestzhao

木虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】如何提高质粒拷贝数

最近提取质粒，提取的质粒的浓度总是不高，导致连接无法进行或者失败，想提高质粒的拷贝数。
据说，在菌体培养时加入氯霉素，可以提高质粒的拷贝数，但不知道该如何处理。

所以向大家请教一下，氯霉素该如何加入，加入量是多少？
其他还有没有什么方法可以提高质粒的拷贝数？
我需要的质粒是pET28b。

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1楼 2010-12-17 11:16:43

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dandan20088810

金虫 (初入文坛)

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引用回帖:

Originally posted by ben1147 at 2010-12-17 11:59:18:
pET不是克隆质粒，本身拷贝数不是太高
人为单方面提高治理拷贝数可能导致质粒结构异常或者在菌体内稳定性下降
与其加氯霉素什么的那么麻烦，不如直接多提几管，合并到一起再沉淀浓度就高了么，或者中提大提都行

同意楼上的说法，只是做连接，多提几管，溶解时少加点水，或多加水浓缩