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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】反敲除
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】反敲除

请问FRT位点都是一样的吗？我对我敲除后的菌进行测序发现FRT位点处有一个突变 会不会对反敲除有影响呐 谢谢
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1楼 2010-12-16 20:27:46
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-12-18 13:20:50:

重新做一次重组敲除，还是比较麻烦的 ，我们实验室的做了好久都没有敲掉，我是比较幸运，敲除了，但是一直被反敲麻烦着，其实这样还不如重做一次敲除呢，不知道金虫敲除有什么高招？

敲除，对于大肠杆菌，Red同源重组是比较好用的方法了，通常情况下，会出现在重组环节，不过，你为什么一定要反敲除呢？留着那个抗性基因影响很大吗？
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13楼2010-12-20 09:16:28
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susizheng

木虫 (著名写手)
会不会是测序的误差，先反敲除着看看。
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2楼2010-12-16 21:25:22
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-12-16 20:27:46:
请问FRT位点都是一样的吗？我对我敲除后的菌进行测序发现FRT位点处有一个突变 会不会对反敲除有影响呐 谢谢

什么叫 反敲除
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3楼2010-12-16 21:44:29
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
wwdxx2004(金币+1): 2010-12-17 20:54:13
dhd997(金币+1):good 2010-12-18 13:53:13
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-12-16 21:44:29:

什么叫 反敲除

反敲除，就是转入抗性片段敲除基因后，转入pCP20表达FLP重组酶，利用抗性片段两端的FRT序列将抗性标记删除。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-17 09:19:24
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