24小时热门版块排行榜    

查看: 2792  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

梦想起飞

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段,咋办啊???? 已有6人参与

今天两次菌落PCR,扩出来的片段都不是目的片段。最初P的是菌的16S,用的是通用引物27F和1492R,扩出来1500bp左右的16S片段,然后将PCR产物切胶回收纯化,并且已检测了回收产物,是1500左右。然后做连接,连接到pMD19—T载体上,转化JM109感受态,次日,平板上长出菌落,白斑居多,蓝斑数个,挑取白斑做菌落PCR,引物用M13,电泳检测PCR产物,条带居然在500bP处!!!吓我一跳!我做了两次了,两次一共挑了19个白斑了,扩出来都是500bp的。怎么回事啊这是?????请大侠们解释一下。感激涕零!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想起飞

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by Arrennew at 2010-12-15 22:37:32:
通用引物退火要在58度以上,就不会扩出乱七八糟的带了。

是吗?这么高啊?好吧……谢谢交流啊!
10楼2010-12-17 10:13:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+5):鼓励积极参与~~~ 2010-12-14 22:25:24
大肠杆菌中也有16S,你的引物可能扩出的是宿主菌的16S, 不是你插入的目的片段
2楼2010-12-14 21:15:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想起飞

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by waiwaidou_1983 at 2010-12-14 21:15:54:
大肠杆菌中也有16S,你的引物可能扩出的是宿主菌的16S, 不是你插入的目的片段

可我用的是M13引物啊,这不是针对载体的吗?怎么会扩出大肠杆菌的基因?
3楼2010-12-14 21:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-17 11:14:29
引用回帖:
Originally posted by 梦想起飞 at 2010-12-14 21:02:33:
今天两次菌落PCR,扩出来的片段都不是目的片段。最初P的是菌的16S,用的是通用引物27F和1492R,扩出来1500bp左右的16S片段,然后将PCR产物切胶回收纯化,并且已检测了回收产物,是1500左右。然后做连接,连接到pM ...

做16s你还菌落pcr,你想干嘛?验证有没有连上?没必要啊,跑电泳大小对了就行了,根本不用验证。。。
小木虫之有关部门负责人
4楼2010-12-14 21:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 5/250 2026-08-16 18:38 by lxmichacl
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见