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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么在浓缩胶的时候漏？
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414941613

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么在浓缩胶的时候漏？ 已有9人参与

大家好，我的实验遇到了些问题。
我跑的是垂直的SDS-PAGE，加入梳子后两个半小时拔梳子。每个孔10 μL样品。
样品在跑浓缩胶的时候容易漏，跑一会明显的看到 loading buffer 向下漏，几条细线似地，漏到与分离胶的分界线位置。我疯了。谢谢大家的解答
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1楼 2010-12-13 22:02:22
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小乖小帅

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 414941613 at 2010-12-16 09:25:49:

我昨晚又跑了，感觉是胶和板之间有缝隙的。是不是浓缩胶放的时间长了点。正常是放多长时间呢？

凝了就行了吧，要是急用就放在37度，大概半小时，要是不着急就室温一小时左右
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20楼2010-12-16 10:42:14
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daringhong

金虫 (小有名气)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-15 10:43:34
你制胶的时候，等分离胶凝好后有没有把上层的水吸干？
要把那部分液体吸干后再在上面制浓缩胶的。否则两层胶中间会有不凝固的液体，影响效果。
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每天进步一点点~~
2楼2010-12-13 22:30:32
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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引用回帖:
Originally posted by 414941613 at 2010-12-13 22:02:22:
大家好，我的实验遇到了些问题。
我跑的是垂直的SDS-PAGE，加入梳子后两个半小时拔梳子。每个孔10 μL样品。
样品在跑浓缩胶的时候容易漏，跑一会明显的看到 loading buffer 向下漏，几条细线似地，漏到与分离胶 ...

正如楼上说的，呵呵。不过有个trick就是压胶的时候不用水，而用1%的SDS，这样倒浓缩胶的时候就不用滤纸条吸干了，只要倒尽就OK了，这样一定会凝在一起的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-12-13 22:35:04
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414941613

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by daringhong at 2010-12-13 22:30:32:
你制胶的时候，等分离胶凝好后有没有把上层的水吸干？
要把那部分液体吸干后再在上面制浓缩胶的。否则两层胶中间会有不凝固的液体，影响效果。

首先谢谢你的解答。我的样品在刚出孔一会就有蓝色的buffer 向下漏，还没有到分界线的位置，而且实验室的其它人也是这样做的，却没有出现我这样的情况。我这种情况感觉是胶的内部有细小的缝隙。
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4楼2010-12-13 23:08:15
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