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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ELISA实验的困惑？
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】ELISA实验的困惑？ 已有10人参与

我在用GBD的ELISA试剂盒做实验，标准曲线浓度高的OD反而比浓度低的OD值要大，所以很郁闷。而在样品中，0.05mg/ml的OD为0.893,但是0.1mg/ml的OD却只为0.726，不知道原因出在哪里？
   我加样过程中有几个孔出现了气泡，而且洗涤的时候用的是排枪，估计各个孔加入洗液的体积可能也有差异？
   请问，这些是不是造成这次ELISA实验数据混乱的原因呢？
   做ELISA过程中还需要注意哪些问题？
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1楼 2010-12-12 15:33:29
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richujs

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-13 00:26:07
有气泡影响比较大。洗板的话，用排枪是可以的。不知道你用的盒子是测什么的
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思想是能力和力量的源泉
2楼2010-12-12 20:34:08
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by richujs at 2010-12-12 20:34:08:
有气泡影响比较大。洗板的话，用排枪是可以的。不知道你用的盒子是测什么的

测单链DNA！
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3楼2010-12-13 08:26:04
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能跟你的盒子也有关系，我有一次也是买个盒子做不出标曲。
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4楼2010-12-13 09:31:45
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一个孔这样，还是很多空这样？有规律没？
我知道有个钩状效应可能会有这种情况发生。
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生物资源交流QQ群：1044518333
5楼2010-12-13 09:31:53
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-12-13 09:31:53:
一个孔这样，还是很多空这样？有规律没？
我知道有个钩状效应可能会有这种情况发生。

主要是个别孔出现气泡，我们的枪不太好用，所以有的时候会出现气泡，不知道这样的影响大不大？
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6楼2010-12-13 09:35:54
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dannel025

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加样尽量不要有气泡，有的话用枪捅一捅就破了。除了洗板尽量不要用排枪，除非你可以保证你排枪和枪头足够好，每次吸液量都相同。
给点建议就是适当增加洗板次数，很多时候数据紊乱就是因为没洗干净而造成背景太深。
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7楼2010-12-13 09:46:36
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dannel025 at 2010-12-13 09:46:36:
加样尽量不要有气泡，有的话用枪捅一捅就破了。除了洗板尽量不要用排枪，除非你可以保证你排枪和枪头足够好，每次吸液量都相同。
给点建议就是适当增加洗板次数，很多时候数据紊乱就是因为没洗干净而造成背景太深。

但是样品比较多，如果不用排枪的话，加样的间隔时间就比较长了，不知道这样对结果的影响大不大？
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8楼2010-12-13 14:05:57
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hujinling0

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
重复实验，单一次实验的数据没有什么说服力，不好作分析。
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9楼2010-12-13 14:10:12
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hujinling0 at 2010-12-13 14:10:12:
重复实验，单一次实验的数据没有什么说服力，不好作分析。

已经重复做了3次，结果都是这样。我的标准曲线分别是0pg/ml，50pg/ml,100pg/ml,250pg/ml,500pg/ml,1000pg/ml

现在的问题是50和100的OD值有问题，经常是50的OD大于100的OD，其他各浓度的OD都是依次增加的，搞不懂，线性不是很好
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10楼2010-12-13 16:22:39
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