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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】[附图]土壤放线菌PCR老扩得不理想，大家给支支招吧
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉

[交流] 【求助/交流】[附图]土壤放线菌PCR老扩得不理想，大家给支支招吧 已有5人参与

土壤放线菌PCR扩得不理想，在目标条带处，会出现两条带。大家给支支招吧

电泳检测图片，实验室没有凝胶成像系统，只能用相机拍了……


反应程序


反应体系




[ Last edited by clearth on 2010-12-11 at 20:02 ]
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1楼 2010-12-10 11:06:47
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yinsongna

金虫 (正式写手)
米有扩过土壤真菌。。但是做过很多PCR  找个内参基因 看看是不是模板的问题吧
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2楼2010-12-10 11:15:33
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉
引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-12-10 11:15:33:
米有扩过土壤真菌。。但是做过很多PCR  找个内参基因 看看是不是模板的问题吧

抱歉是放线菌……………………
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3楼2010-12-11 17:11:36
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~ 2010-12-11 23:41:23
提高一下退火温度，做个touch down试一下，祝你好运。
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4楼2010-12-11 18:47:10
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉
引用回帖:
Originally posted by yuanbo934 at 2010-12-11 18:47:10:
提高一下退火温度，做个touch down试一下，祝你好运。

谢谢啊
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5楼2010-12-11 19:53:35
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
以前曾经扩细菌的16s，引物酶bfr啥的都没问题，但是扩出来就是两条带。。。
不管了，直接连~
结果，测序出来，没什么异常
lz可以借鉴一下
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小木虫之有关部门负责人
6楼2010-12-12 00:22:28
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-12-12 00:22:28:
以前曾经扩细菌的16s，引物酶bfr啥的都没问题，但是扩出来就是两条带。。。
不管了，直接连~
结果，测序出来，没什么异常
lz可以借鉴一下

我这个不是连接转化，是上DGGE，我担心分离的不好
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7楼2010-12-12 10:09:28
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在雨中

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度高了吧?还有50微升体系,模板加0.5?是不是少了?
我一般加1-2微升.
放线菌没有做过.细菌,真菌做的很熟.退火温度55-56°都蛮好的呀.为何取这么高,你
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8楼2010-12-12 13:45:22
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clearth

木虫之王 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2010-12-12 13:45:22:
退火温度高了吧?还有50微升体系,模板加0.5?是不是少了?
我一般加1-2微升.
放线菌没有做过.细菌,真菌做的很熟.退火温度55-56°都蛮好的呀.为何取这么高,你

因为DNA合成单上报告两条引物的Tm分别是68.8°和52.18°,（68.8°+52.18°）/2=60.5°，我是这么算的
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9楼2010-12-12 20:03:57
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