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richenim

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞,结果“诡异”,求帮助!

最近在做AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞,用的是凯基生物的AnnexinV/PI试剂盒,细胞给药24小时后,有70%都变圆收缩,还有20-30%都漂了起来,但是用流式检测凋亡的结果却只有百分之几而已,请高手帮我解答下这是为什么啊?
PS:本人之前还做了hochest33342和DNA Ladder,结果都显示我的药是有促凋亡作用的。
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另外,如果细胞比较脆,在离心前先37℃孵育几分钟
8楼2010-12-10 11:26:03
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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
richenim(金币+5): 2010-12-10 11:39:23
dhd997(金币+2):good 2010-12-10 14:36:38
我们实验室用凯基的双染试剂盒就是没做出来,后来换了Trevigen的(和R&D搞贴牌的)就做出来了~

另外要考虑制备的问题,是不是制备的时候损失了很多细胞
还有就是有没有注意用无EDTA的胰酶消化细胞
如果用了EDTA的胰酶,有没有PBS洗
还有检测的时候有没有注意时间,以及避光等
2楼2010-12-10 10:35:38
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richenim

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-10 10:35:38:
我们实验室用凯基的双染试剂盒就是没做出来,后来换了Trevigen的(和R&D搞贴牌的)就做出来了~

另外要考虑制备的问题,是不是制备的时候损失了很多细胞
还有就是有没有注意用无EDTA的胰酶消化细胞
如果用 ...

我送检的地方都是用的凯基生物的哦,别人都可以做出来哦!
给药时间到了后,我是收集上清,再用胰酶-EDTA消化细胞,离心1000rpm,5min,再用PBS洗两次,再将细胞保存在PBS里面,拿去检测。(我从学校到送检的地方有两个小时,两个小时中细胞就保存在PBS里面,然后放在冰盒里,不知道这个时间的耽误有没有问题哦!)
3楼2010-12-10 11:06:36
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上图吧……结合图片给你做分析。而且我做的方法跟你的有点点不一样
4楼2010-12-10 11:09:37
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