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neversaydi

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于western 求助,高手请帮帮忙 已有8人参与

我想跑185kd的蛋白。
想问一下,这样的话,
1.浓缩胶和分离胶应该各用多少浓度的啊?
2.转膜和电泳的时候应该怎么个条件啊。
因为第一次做,所有求教一下,请各位大师大侠不吝赐教,小女子在这里叩谢啦
谢谢
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neverdaydie!
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shuaisuo1984

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
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看天(金币+4):鼓励新宠多交流 2010-12-14 12:32:40
我们一般180KD的转膜是40v,3h,湿转,都能出来。希望对你有帮助~~~
10楼2010-12-14 11:01:13
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bingdong05

银虫 (正式写手)

★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-09 11:54:28
185kd,8%的胶应该可以,上层胶一般都是3%的,另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定
2楼2010-12-07 16:31:46
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neversaydi

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by bingdong05 at 2010-12-07 16:31:46:
185kd,8%的胶应该可以,上层胶一般都是3%的,另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定

一般跑60KD左右,是电泳80V  2h左右,转膜300MA  90min。
那这样的话,180KD应该是怎么个条件呢?谢谢大师指点
neverdaydie!
3楼2010-12-07 18:47:01
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:54:37
如果你有预染的蛋白marker的话,可以通过蛋白marker来确定,
如果没有的话100V 2 hours 应该可以,转膜时间最好长一点semi-dry可以2-3hours
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
4楼2010-12-08 04:47:11
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