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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教蛋白冻干的问题
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请教蛋白冻干的问题

疏水层析后，想冻干得到蛋白，请问是直接抽真空冻干吗？要不要脱盐、加冻干保护剂的？如果加的话，加什么呢？谢谢大家啊
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1楼 2010-12-06 10:22:43
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)
sxxuan(金币+1): 2010-12-20 11:43:23
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2010-12-17 09:21:24:

嗯，文献上说的大小和实际的大小不一样。这里用的方法好像和正常的也不一样。也没有检查蛋白的大小
其实我要做的实验就是，原核表达蛋白，然后疏水层析纯化，再以超滤管或什么方法除盐浓缩蛋白，最后冻干的。现 ...

除盐的方式有很多，主要是根据目的蛋白的多少可以确定，但肯定的是多一个操作步骤，就多一些损失，特别是对于蛋白质量不多的来说，一定要慎重。如果蛋白量多，可以考虑G-25除盐，也可以考虑离子交换、包括阴离子交换和阳离子交换，如DEAE、CM、Q等离子交换，也可以用疏水层析法，上述方法要求蛋白量要多一些，并且离子交换和疏水层析还有可能去除杂蛋白，如果蛋白量少，只能考虑超滤和透析袋的方式了
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29楼2010-12-17 10:13:18
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-12-06 20:58:31
sxxuan(金币+1): 2010-12-10 10:04:14
直接冻干试试。脱盐可能影响蛋白质结构，加保护剂可能影响冻干效果。
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2楼2010-12-06 20:37:15
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-12-06 20:58:42
sxxuan(金币+1): 2010-12-10 10:04:19
如果蛋白用量少的话，可以不用除盐！加点保护剂可以的
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3楼2010-12-06 20:41:20
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2010-12-06 20:41:20:
如果蛋白用量少的话，可以不用除盐！加点保护剂可以的

是要做标准品的，所以要求比较高。保护剂可以放什么呢？谢谢你
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4楼2010-12-08 09:15:33
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