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[交流]
【求助/交流】连接几次，仍然不见菌落出现
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最近做载体构建，很不顺。 主要是把酶切后的片段（约2000bp)连到载体上，转化后总是没有菌落出现。 前些天相同的位置连了另一条片段出现了很多克隆，测序也是对的，现在真是很迷茫（感态应该没问题，因为用的同一批；T4Ligase应该也没问题） [ Last edited by zhangxn2010 on 2010-12-4 at 09:37 ] PS:本帖中问题已在2011年解决，当时没有放上具体原因，现做说明，以对有相关问题的虫友有启发。 用相当长的时间排除，最后在电泳液上找出了问题，第一个载体构建完之前一直选用TAE做缓冲液，后来一个刚来的海归博士建议用TBE（理由当然是条带清楚之类的），噩梦就开始了，原来是TBE和胶回收试剂盒有冲突，造成回收产物不能进行连接。 希望虫子们多注意小细节，我因为这点失误耽误近两月，领导眼都快绿了（当然还有其他并行工作，否则直接被炒掉了）。 [ Last edited by zhangxn2010 on 2012-12-11 at 15:10 ] |
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8楼2010-12-06 12:46:22
自己顶一下，希望大家来讨论。2楼2010-12-04 09:38:04
3楼2010-12-04 10:35:50
4楼2010-12-06 11:32:35
28