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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA割胶纯化
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA割胶纯化 已有5人参与

DGGE后，对图谱中的主要优势条带进行割胶，用试剂盒回收纯化，想克隆连载体进行测序，但如何知道自己回收的ＤＮＡ是否符合克隆的要求呢，之前把回收的ＤＮＡ，又进行了一次ＰＣＲ结果琼脂糖一检测，整个甬道都是亮亮的，就是没有目的条带，我就无语了，不敢往下克隆了，大家说这种情况我割胶回收的ＤＮＡ还能用于下一部实验吗？　
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1楼 2010-12-03 10:00:15
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
自己顶一下　，期待大家的回复指导:
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2楼2010-12-03 10:01:14
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-03 10:13:22
你的回收产物再多稀释个100倍PCR试试
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3楼2010-12-03 10:03:37
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):注册这么早，才发了9贴，欢迎常来生物版 2010-12-06 12:32:48
同意板凳的，产物做PCR要稀释50-200倍的，但是多数情况下稀释后就无法获得目的条带了，你可以在50ul的pcr体系中加入0.1-0.5来作为模板pcr，好运
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4楼2010-12-03 11:12:20
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2010-12-03 10:03:37:
你的回收产物再多稀释个100倍PCR试试

好滴  我再试试 谢谢啦
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5楼2010-12-03 20:26:34
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2010-12-03 11:12:20:
同意板凳的，产物做PCR要稀释50-200倍的，但是多数情况下稀释后就无法获得目的条带了，你可以在50ul的pcr体系中加入0.1-0.5来作为模板pcr，好运

恩 好 是稀释后试试 谢谢大家啊
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6楼2010-12-03 20:29:34
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-03 20:29:34:

恩 好 是稀释后试试 谢谢大家啊

DGGE 的条带没法再稀释了，本身回收条带含有的细菌DNA就很少，回收后就更少了。

建议切胶后溶解在无菌水里，4度过夜后直接取2 uL为模板做PCR。
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7楼2010-12-06 10:49:04
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lhwen182

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-03 10:00:15:
DGGE后，对图谱中的主要优势条带进行割胶，用试剂盒回收纯化，想克隆连载体进行测序，但如何知道自己回收的ＤＮＡ是否符合克隆的要求呢，之前把回收的ＤＮＡ，又进行了一次ＰＣＲ结果琼脂糖一检测，整个甬道都是亮 ...

你好，最近我也做DGGE割胶回收，回收后P完后再做了一次DGGE，结果发现跑胶的时候条带很杂，基本上没有单一的带。
请问一下，你割胶回收后有没有去测序，怎么保证割胶回收后验证时的条带单一？
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8楼2011-05-27 15:23:30
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