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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】关于神经元的western所遇到的问题
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huangwensh

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助】关于神经元的western所遇到的问题

各位，我是用新生大鼠海马神经元加药后提蛋白做western，但是做了6次始终不成功，三次是根本看不见荧光，还有两次是整张pvdf膜都发光，还有一次是膜的中间一片发光，其他地方不发光，是怎么回事呀、、？？是不是蛋白提的不好啊？？
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1楼 2010-11-30 20:24:43
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huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
1959387楼: Originally posted by zrtpaopao at 2012-03-24 11:18:05:
我做western 也出现这种情况，最近新买了一个二抗，加上ECL后整张膜都很亮，但是它太亮了导致曝出的片子乌漆吗黑一片，根本看不见条带，而且淬灭时间很短，几分钟后再用灯照一下，根本没有荧光了。苦恼中，我现 ...

二抗是BSA， 1%的，我以前做的是原代，总是出现这种情况，直到毕业也没解决，后，来做别的细胞就没出现过这种情况，哎，
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19楼2012-03-24 11:46:20
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kno3

捐助贵宾 (著名写手)
★
huangwensh(金币+1): 2010-12-02 10:40:17
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-12-03 21:39:07
先用现有的条件做下预实验呢？确定不是你自己操作的问题，或是东西没配好之类的问题。
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2楼2010-12-02 00:24:43
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by huangwensh at 2010-11-30 20:24:43:
各位，我是用新生大鼠海马神经元加药后提蛋白做western，但是做了6次始终不成功，三次是根本看不见荧光，还有两次是整张pvdf膜都发光，还有一次是膜的中间一片发光，其他地方不发光，是怎么回事呀、、？？是不是蛋 ...

请问发光的时候是什么感觉呢？
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3楼2011-01-10 08:59:38
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huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-10 08:59:38:



请问发光的时候是什么感觉呢？

加上ECL的时候在红光灯下就能看到光，关了关了红光灯，会很亮，但是很快就崔灭了也就5分钟吧，还有两次是关了灯以后光慢慢出现的，等了半分钟才有光，但是崔灭的时间也很短，很亮的光，
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4楼2011-01-10 11:08:17
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