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huangwensh

木虫 (著名写手)


[交流] 【求助】关于神经元的western所遇到的问题

各位,我是用新生大鼠海马神经元加药后提蛋白做western,但是做了6次始终不成功,三次是根本看不见荧光,还有两次是整张pvdf膜都发光,还有一次是膜的中间一片发光,其他地方不发光,是怎么回事呀、、??是不是蛋白提的不好啊??
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zrtpaopao

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1798011楼: Originally posted by huangwensh at 2011-01-10 11:08:17:
加上ECL的时候在红光灯下就能看到光,关了关了红光灯,会很亮,但是很快就崔灭了也就5分钟吧,还有两次是关了灯以后光慢慢出现的,等了半分钟才有光,但是崔灭的时间也很短,很亮的光,

我做western 也出现这种情况,最近新买了一个二抗,加上ECL后整张膜都很亮,但是它太亮了导致曝出的片子乌漆吗黑一片,根本看不见条带,而且淬灭时间很短,几分钟后再用灯照一下,根本没有荧光了。苦恼中,我现在猜想是不是二抗的浓度加太大了,你一般二抗用什么溶液配,浓度多大?
16楼2012-03-24 11:18:05
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kno3

捐助贵宾 (著名写手)



huangwensh(金币+1): 2010-12-02 10:40:17
qinhy(金币+1):多谢指教,欢迎常来药学版! 2010-12-03 21:39:07
先用现有的条件做下预实验呢?确定不是你自己操作的问题,或是东西没配好之类的问题。
2楼2010-12-02 00:24:43
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pidou213

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by huangwensh at 2010-11-30 20:24:43:
各位,我是用新生大鼠海马神经元加药后提蛋白做western,但是做了6次始终不成功,三次是根本看不见荧光,还有两次是整张pvdf膜都发光,还有一次是膜的中间一片发光,其他地方不发光,是怎么回事呀、、??是不是蛋 ...

请问发光的时候是什么感觉呢?
3楼2011-01-10 08:59:38
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huangwensh

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-10 08:59:38:



请问发光的时候是什么感觉呢?

加上ECL的时候在红光灯下就能看到光,关了关了红光灯,会很亮,但是很快就崔灭了也就5分钟吧,还有两次是关了灯以后光慢慢出现的,等了半分钟才有光,但是崔灭的时间也很短,很亮的光,
4楼2011-01-10 11:08:17
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