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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒单酶切后竟然两条带
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xingxing342

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒单酶切后竟然两条带 已有22人参与

提完质粒后电泳有两条带，用TAKARA的酶单酶切后，还是两条带，一条比质粒的带小一点，另一条跟质粒的一样大，晕啊！


1 marker
2、3 单酶切
4、5单酶切
6空
7 为2、3的质粒
8为4、5的质粒

[ Last edited by xingxing342 on 2010-11-30 at 11:29 ]
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1楼 2010-11-30 11:13:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xingxing342

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-11-30 16:13:50:
一般单酶切没有切完全的话就会出现两条带，一条是环状，一条是稍微大一些的线性DNA，可是看楼主这图怎么感觉有点奇怪呢？

呵呵 我也很奇怪啊 怎么会这样啊
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15楼2010-11-30 16:22:12
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46437772

木虫 (小有名气)

给你提供个参考体系

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒 5微
buffer 3微
酶 0.5微
水补到30微

37度酶切5-6小时

如果酶切条带要回收，质粒可以增加到8微
赞一下(2人) 回复此楼
18楼2010-11-30 16:57:34
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普通回帖

fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LZ上图吧，这样好分析些
赞一下(1人) 回复此楼
独YY不如众YY！！！
2楼2010-11-30 11:18:24
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
上图吧，
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-11-30 11:18:46
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-03 11:52:01
单酶切切两条带出来也不奇怪啊，多条带都有可能，要看你的序列上面有几处酶切位点。
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4楼2010-11-30 12:03:15
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-11-30 19:43:51
小心序列和载体上有肯能存在的酶切位点哦
尤其是条带只比质粒小点
说明两个酶切位点还离得不远，自己注意查看一下
赞一下(2人) 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
5楼2010-11-30 12:28:54
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):不排除这个可能 2010-12-03 11:52:26
如果呢保证酶切位点单一，从你的图和叙述上看，应该是不完全酶切造成的
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-11-30 12:32:40
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xingxing342

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-11-30 12:03:15:
单酶切切两条带出来也不奇怪啊，多条带都有可能，要看你的序列上面有几处酶切位点。

序列里没有该酶切位点，只有载体上有。
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7楼2010-11-30 12:32:48
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xingxing342

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-30 12:32:40:
如果呢保证酶切位点单一，从你的图和叙述上看，应该是不完全酶切造成的

是酶切体系影响的吗？我还切过6h 也是这样的。
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8楼2010-11-30 12:35:01
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):星活性也很重要 2010-12-03 11:52:43
引用回帖:
Originally posted by xingxing342 at 2010-11-30 12:35:01:

是酶切体系影响的吗？我还切过6h 也是这样的。

体系不合适或者切的时间太长的话有星号活性会出现酶切结果与预期不符的情况
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9楼2010-11-30 12:40:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得更像没有切干净……
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10楼2010-11-30 12:46:58
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