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2009103158

新虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】southern杂交求助!

本人正在做植物基因组的southern杂交以确定外源基因的拷贝数,用的是ROCHE的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I。今天出了结果,十分郁闷,只有marker和阳性对照显色了,样品没有颜色。请看附图,跪求高人相助!!!

上图为提取的基因组DNA,以Hind111为marker

上图为酶切基因组后取出的5ul样跑胶看基因组是否被酶切完全,酶切体系为100ul

上图为转膜结束后检验转磨是否完全,残留的片段是较大的片段

上图为刚刚出来的结果,只有DNA marker和阳性对照显色,样品没有一个显色的
忙碌了一星期,却没有得到结果,十分郁闷,请经验人士给予帮助!!!
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刁寒冰

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1947597楼: Originally posted by baiyongqin at 2011-12-27 16:50:10
我也遇到过很多次的同样情况,很明显,你的DNA降解很严重,而且有严重的DNA污染。因为你的阳性对照很清晰,背景也很清楚,说明probe是没问题的,只是DNA 出问题了。建议改善DNA 的质量,祝好运!可以给你参考一下我 ...

请问marker怎么会显色呢?很奇怪
9楼2012-09-14 13:00:28
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查看全部 13 个回答
2009103158(金币+1): 2011-02-11 20:13:00
从你的酶切产物跑胶结果来看,你的基因组DNA降解了,因为你的条带不是上面亮下边暗,就是正好相反,高质量的基因组DNA酶切出来跑胶后是均匀的一片
1



2



3



好的酶切,电泳效果应该是这样,其中主要取决于DNA质量的好坏
2楼2010-11-28 17:07:14
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Sureking

新虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2010-11-28 17:07:14:
从你的酶切产物跑胶结果来看,你的基因组DNA降解了,因为你的条带不是上面亮下边暗,就是正好相反,高质量的基因组DNA酶切出来跑胶后是均匀的一片
1

[img]http://pic.muchong.com/201011/28/849017_170602.jpg[ ...

下面亮的应该是没有除去的rna吧
3楼2011-11-19 20:59:36
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mascotte

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-12-27 17:30:49
没做过生物素标记的探针,只做过同位素标记的,同位素标记探针的敏感度大大高于生物素;
探针长度不够的话杂交的效果也不好,我一般用长度大于500bp的探针;
探针的类型不一样的话(DNA or RNA),杂交的温度也有区别;
膜的选择应该符合样品和探针的类型;
最后,杂交液中的硫酸葡聚糖能够提高信号强度,但是太多了背景会脏。

Good Luck!
4楼2011-11-19 22:26:00
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