应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】southern杂交求助！
51/1返回列表
查看: 2271  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

2009103158

新虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】southern杂交求助！

本人正在做植物基因组的southern杂交以确定外源基因的拷贝数，用的是ROCHE的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I。今天出了结果，十分郁闷，只有marker和阳性对照显色了，样品没有颜色。请看附图，跪求高人相助！！！

上图为提取的基因组DNA，以Hind111为marker

上图为酶切基因组后取出的5ul样跑胶看基因组是否被酶切完全，酶切体系为100ul

上图为转膜结束后检验转磨是否完全，残留的片段是较大的片段

上图为刚刚出来的结果，只有DNA marker和阳性对照显色，样品没有一个显色的
忙碌了一星期，却没有得到结果，十分郁闷，请经验人士给予帮助！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-28 15:42:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sureking

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2010-11-28 17:07:14:
从你的酶切产物跑胶结果来看，你的基因组DNA降解了，因为你的条带不是上面亮下边暗，就是正好相反，高质量的基因组DNA酶切出来跑胶后是均匀的一片
1

[img]http://pic.muchong.com/201011/28/849017_170602.jpg[ ...

下面亮的应该是没有除去的rna吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-19 20:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)
2009103158(金币+1): 2011-02-11 20:13:00
从你的酶切产物跑胶结果来看，你的基因组DNA降解了，因为你的条带不是上面亮下边暗，就是正好相反，高质量的基因组DNA酶切出来跑胶后是均匀的一片
1



2



3



好的酶切，电泳效果应该是这样，其中主要取决于DNA质量的好坏
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-28 17:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mascotte

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-12-27 17:30:49
没做过生物素标记的探针，只做过同位素标记的，同位素标记探针的敏感度大大高于生物素；
探针长度不够的话杂交的效果也不好，我一般用长度大于500bp的探针；
探针的类型不一样的话（DNA or RNA），杂交的温度也有区别；
膜的选择应该符合样品和探针的类型；
最后，杂交液中的硫酸葡聚糖能够提高信号强度，但是太多了背景会脏。

Good Luck！
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-11-19 22:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马马和虎虎

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问，Marker为什么可以显色啊？
赞一下(4人) 回复此楼
6楼2011-12-27 18:44:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭