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wmqouc

金虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】蛋白原核表达求助

各位大侠:
大家好!
我要表达一水溶性蛋白,序列如下
center]mkvsaallwl lliaaafspq glt" gpasvpt tccfnlanrk iplqrlesyr ritsgkcpqk
avifktklak dicadpkkrw vqdsmkyldq ksptpkp,共97个氨基酸。
用pet28质粒,BL21宿主菌表达,一直表达纯化不好,后来换用pmal-p4x质粒,TB1宿主菌表达,表达纯化仍然不好。
最近发现该蛋白的前23个氨基酸(引号划线部分)是信号肽,成熟的是没用这23个氨基酸的。请问各位大侠,这个蛋白表达纯化不出来,是否和这23个氨基酸的信号肽有关系呢?
请各位大侠赐教!
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wmqouc

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-11-26 18:34:42:
到底是表达不好还是纯化不好?
表达不好可能跟信号肽有关,纯化不好跟信号肽没关系的。

28a的酶切位点是EcoR1、Hind111,没有融合表达。28a表达不好,点杂交效果很不好,怀疑与信号肽有关。
pmal-p4x有融合蛋白MBP,MBP后紧接着是我的蛋白
,表达可以,点杂交很明显,但纯化不出来,过镍柱纯化后条带很杂,这和信号肽有关吗?
7楼2010-11-26 19:02:35
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:48:05
序列中有起始密码子嘛?
2楼2010-11-26 18:17:33
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wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:58:17
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:59:11
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:59:11
到底是表达不好还是纯化不好?
表达不好可能跟信号肽有关,纯化不好跟信号肽没关系的。
3楼2010-11-26 18:34:42
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:49:09
28a载体用的酶切位点是啥?
如果是融合表达,大肠杆菌可能就不会把前面那段当成信号肽的。
4楼2010-11-26 18:37:17
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